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PCR/Q-PCR/RT-PCR实验

简要描述:

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA的片段的分子生物学技术。

更新时间:2020-05-14

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA的片段的分子生物学技术。

 

实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,最终对起始模板进行精确的定量分析。实时荧光定量PCR的检测方法分为SYBRGreen I法和TaqMan探针法等。在研究领域中,qPCR广泛应用于细胞中的基因拷贝数的测定,其常与反转录PCR(RT-PCR)一起使用以精确测定基因表达量,如通过检测细胞mRNA水平可以测定不同环境或药物作用下基因表达的情况。

 RT-PCR  

 

RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应(PCR)相结合的技术。分为两步法和一步法RT-PCR。 一步法RT-PCR能克隆微量mRNA而不需构建cDNA文库,即cDNA合成与PCR反应在同一Buffer及酶中进行,一步法完成,省略了cDNA与PCR之间的过程。一步法需要基因特异性引物,适合从大量的RNA样本中得到少量基因(数目)的信息。两步法RT-PCR:首先用反转录酶AMV、M-Mulv或TthDNA聚合酶合成cDNA,然后以cDNA为模板进行PCR。两步法即先进行cDNA合成再进行PCR操作,适合从少量的RNA样本中得到大量基因(数目)的信息。 

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