PCR/Q-PCR/RT-PCR实验

聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA的片段的分子生物学技术。

实时荧光定量PCR（Q-PCR）技术利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，终对起始模板进行精确的定量分析。实时荧光定量PCR的检测方法分为SYBRGreen I法和TaqMan探针法等。在研究领域中，qPCR广泛应用于细胞中的基因拷贝数的测定，其常与反转录PCR（RT-PCR）一起使用以精确测定基因表达量，如通过检测细胞mRNA水平可以测定不同环境或药物作用下基因表达的情况。

RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应，是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应（PCR）相结合的技术。分为两步法和一步法RT-PCR。 一步法RT-PCR能克隆微量mRNA而不需构建cDNA文库,即cDNA合成与PCR反应在同一Buffer及酶中进行,一步法完成,省略了cDNA与PCR之间的过程。一步法需要基因特异性引物，适合从大量的RNA样本中得到少量基因（数目）的信息。两步法RT-PCR:首先用反转录酶AMV、M-Mulv或TthDNA聚合酶合成cDNA,然后以cDNA为模板进行PCR。两步法即先进行cDNA合成再进行PCR操作，适合从少量的RNA样本中得到大量基因（数目）的信息。