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重组IgG制备

发布时间:2021-12-13   点击次数:51次

随着重组蛋白技术的进一步完善,真核哺乳动物细胞蛋白表达系统凭着蛋白折叠和完善的翻译后休息系统,表达的抗体更接近天然构象,从而具有和天然抗体相同的生物活性,因此常用于功能蛋白、抗体及临床疫苗的生产。艾柏森生物提供工业级别重组IgG、Fab和ScFv等抗体片段的制备和纯化服务。

瞬时转染表达

瞬时转染(transienttransfection)是将重组抗体基因导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的DNA不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。艾柏森提供从基因优化、载体构建、瞬转HEK293细胞/CHO细胞、表达纯化小试以及大规模发酵服务。可以短时间内生产mg至g级重组IgG。

构建稳定细胞系

构建目的基因的表达质粒后,可通过电转、慢病毒转染等方法,将质粒转染至宿主细胞。选用DHFR /GS基因表达系统,将转染的细胞培养在合适的选择性培养基中,然后进行MTX/MSX压力筛选,以产生稳定细胞库。

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艾柏森生物使用MolecularClonePix2系统,高通量、自动化的筛选出100-200个高水平分泌克隆,并从中挑选最佳10-20个高产克隆,进行下一步的稳定性测试。我们挑选出最优的10个克隆,进行10次传代后,qPCR和WB法检测细胞株的稳定性。我们提供序列及载体报告, 3株表达zuihao的细胞株,表达分析、稳定性测试报告以及详细的稳定细胞株构建报告。




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