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噬菌体筛选关于噬菌体的展示技术解读

发布时间:2020-07-07   点击次数:60次
   噬菌体筛选展示技术经近20年的发展和完善,已被广泛应用于抗原抗体库的建立、药物设计、疫苗研究、病原检测、基因治疗、抗原表位研究及细胞信号转导研究等。噬菌体展示系统模拟了自然免疫系统,使我们有可能模拟体内抗体生成过程,构建高亲和力抗体库。由于噬菌体展示技术实现了基因型和表型的有效转换,使研究者在基因分子克隆基础上实现了蛋白质构象体外控制,从而为获取具有良好生物学活性的表达产物提供了强有力手段。另外,噬菌体展示技术已成为不经过免疫获取特异性人源抗体的新途径,为获取对人类和动物疾病有诊断和治疗价值的单克隆抗体提供了重要手段。
  噬菌体展示技术是将多肽或蛋白质的编码基因插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,在阅读框正确且不影响其他外壳蛋白正常功能的情况下,使外源多肽或蛋白与外壳蛋白融合表达,融合蛋白随子代噬菌体的重新组装而展示在噬菌体表面。展示到噬菌体表面的多肽或蛋白保持相对独立的空间结构和生物活性,可以与靶分子结合和识别。噬菌体展示的肽库或蛋白库与固相抗原结合,洗去未结合的噬菌体,然后用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体,中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增,经过3-5轮的富集,逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例,最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。
  用抗体作为噬菌体筛选的蛋白,从噬菌体展示的随机多肽库中,筛选出可以与抗体特异性结合的噬菌体,经测序分析,获得该抗体识别的抗原表位。该技术为抗原抗体反应机制研究,诊断试剂开发,疫苗制备等提供依据。
  目前的表位鉴定技术能够实现:
  1.单抗药物及诊断用单抗的制备;
  2.研制包括“通用”目标在内的治疗性和预防性重组多价肽疫苗;
  3.研制单表位或重组多表位肽检测抗原;
  4.筛选基于表位基序的疾病、肿瘤等新的特异诊断标志物;
  5.高通量发现同源蛋白中全部保守性和特异性表位;
  6.筛选功能性抗体表位或者抗体中和性及可及性表位;
  7.为表位水平分析病毒遗传进化和变异,提供抗原漂移和转移的直接证据。
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