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Southern blot(非放射性标记)

简要描述:

Southern blot 是检测DNA样品中是否含有目的DNA的片段的技术。将凝胶电泳分离得到的DNA的片段转移到膜上,并采用探针杂交法检测目的DNA的存在。在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。

更新时间:2020-05-14

Southern blot 是检测DNA样品中是否含有目的DNA的片段的技术。将凝胶电泳分离得到的DNA的片段转移到膜上,并采用探针杂交法检测目的DNA的存在。在遗传病诊断、DNA的图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。

 

Southern印迹杂交技术包括两个主要过程:一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹(blotting);二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程。

 

操作流程如下:

1.        限制性酶切将DNA切割成小片段

2.        电泳法分离DNA的片段。

3.        将DNA从凝胶转移到硝酸纤维膜或PVDF上

4.        确认DNA转移是否完全

5.        UV法将DNA固定到膜上

6.        探针的非放射性标记(生物素酰化法)

7.        进行探针和膜的杂交

8.        根据标记的探针的特性,进行探针检测和对结果的分析

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