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荧光素酶报告分析实验

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荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。与荧光蛋白不同的是,荧光素酶不需要额外光源,但是需要加入荧光素。

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更新时间:2020-05-14
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荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。与荧光蛋白不同的是,荧光素酶不需要额外光源,但是需要加入荧光素。

 

荧光素酶报告基因实验是检测转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。大致流程如下:

1.        构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒,如pGL3-basic等。

2.        将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子,则荧光素酶基因就会表达,荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

3.        加入特定的荧光素酶底物,荧光素酶与底物反应,产生荧光,通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性,从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。除此以外,该实验可以研究microRNA对靶基因的调控。

 

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