转染级线性聚乙烯亚胺（MW25000）

转染级线性聚乙烯亚胺（MW25000）是一种基于聚乙烯亚胺的瞬时转染试剂产品，具有较高的转染效果。聚乙烯亚胺是一种具有高阳离子电荷的有机大分子聚合物，容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物。该复合物与细胞表面阴离子结合，通过内吞作用进入细胞。该转染试剂细胞毒性低，适用于多种细胞系，已广泛应用于重组蛋白、AAV等的生产。

1. 试剂配置

所需材料：

去离子水或以上生物级水、12 mol/L盐酸（HCl）、10 mol/L氢氧化钠（NaOH）、一次性 0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。

储存液配置：

⑴ 将1 g转染级线性聚乙烯亚胺25,000溶解于900 mL去离子水中，边搅拌（可加热至60-80℃）边滴加12 M盐酸，调整至pH＜2.0，搅拌3小时以上至溶解；

⑵ 用10 M氢氧化钠调整pH至6.9~7.1；

⑶ 将溶液转入量筒（或量杯）内，加水定容至1 L；

⑷ 用一次性0.2 µm过滤器真空过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液；

⑸ 可根据需要分装储存液，储存在-20℃可保存1年；储存液复融后不可重新冻存。

2. 转染操作流程

接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在70~80%为宜；

准备DNA-转染试剂复合物：

⑴ 将DNA、转染试剂和稀释剂先回复至室温；

⑵ 用适合的无蛋白培养基稀释适量DNA；

⑶ 按照一定比例（每1 μg DNA需用1-5 μL转染试剂，建议自行摸索配比），将稀释后的转染试剂滴加至装有DNA溶液的试管（勿颠倒添加顺序），一边轻轻涡旋，充分混匀，室温静置10~25分钟孵育。

转染细胞：

⑴ 在无血清条件下转染时，去除细胞培养基，替换成无血清培养基；

⑵ 细胞中加入适量DNA-转染试剂复合物，轻轻混匀，转染6-8小时后，更换新鲜预热的培养基；

⑶ 在37℃、5% CO₂培养箱中培养，转染后24小时即可检测到转入基因的表达（可自行确定适合的检测时间）。

运输及储存条件

运输条件：室温运输

保存条件：粉末在室温或4℃保存，有效期2年。

注意事项

1. 对大多数细胞，每1 μg DNA使用3 μL转染试剂能获得较高转染效率，也可尝试每1 μg DNA使用1.5~4 μL转染试剂进行优化。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途。