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提取植物蛋白的方法——艾柏森生物

更新时间:2024-03-25点击次数:205


 

植物蛋白提取是分子生物学和生物化学研究中的关键步骤之一,其成功与否直接影响到后续实验的结果和分析。以下是常用的植物蛋白提取方法的详细介绍:

1. 组织样品的准备

 

选择组织: 根据研究对象选择适当的植物组织,如叶片、根、果实等。

 

新鲜样品: 采集新鲜的植物组织样品,避免冷冻和长时间保存导致蛋白质降解。

 

冷冻粉碎: 快速将植物组织置于液氮中冷冻,并用研钵和研钉粉碎成细胞粉末。

 

2. 蛋白提取缓冲液的选择

 

缓冲液pH值: 选择适当pH值的提取缓冲液,一般在7.0-8.0之间,以维持蛋白质的稳定性。

 

含有保护剂: 添加蛋白酶抑制剂、还原剂和表面活性剂等,以保护蛋白质不受降解和氧化。

 

离心: 使用低速离心将细胞碎片与提取缓冲液分离,收集上清液作为提取的蛋白质样品。

 

3. 超声波破碎法

 

原理: 利用超声波的机械作用和热效应破坏细胞壁,释放蛋白质。

 

 

操作: 将组织样品悬浮在提取缓冲液中,经过超声处理,然后离心去除细胞碎片,收集上清液中的蛋白质。

 

4. 搅拌破碎法

 

原理: 利用机械力破坏细胞壁,释放蛋白质。

 

操作: 将组织样品与提取缓冲液置于高速搅拌机中,搅拌破碎细胞,然后离心去除细胞碎片,收集上清液中的蛋白质。

 

5. 液氮研磨法

 

原理: 利用液氮的低温和机械研磨作用破碎细胞壁,释放蛋白质。

 

操作: 将组织样品置于液氮中冷冻,然后在研钵中用研钉研磨成细胞粉末,加入提取缓冲液,最后离心收集上清液中的蛋白质。

 

6. 离心法

 

原理: 利用离心的作用将细胞碎片与提取液分离。

 

操作: 经过超声波破碎、搅拌破碎或液氮研磨后,用低速离心离心去除细胞碎片,收集上清液中的蛋白质。

 

7. 蛋白质含量的测定

 

BCA法: 使用BCA蛋白定量试剂盒等蛋白质测定方法,测定提取的蛋白质含量。

 

 

SDS-PAGE 利用SDS-PAGE电泳分析提取的蛋白质的纯度和分子量。

 

植物蛋白提取方法的选择应根据实验要求、植物样品的性质和实验室条件等因素综合考虑,合理选用适合的方法进行提取,以确保蛋白质的高质量和稳定性。

 


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