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Northern Blot实验外包

简要描述:

Northern Blot或称RNA印迹,是通过测定样品中的RNA以检测基因表达的分子生物学操作。通过检测细胞分化过程中或细胞在不同环境条件下特定基因的表达情况可观察到细胞调控或了解细胞功能等。

更新时间:2020-05-14

或称RNA印迹,是通过测定样品中的RNA以检测基因表达的分子生物学操作。通过检测细胞分化过程中或细胞在不同环境条件下特定基因的表达情况可观察到细胞调控或了解细胞功能等。

 

Northern blotting技术流程包括采用电泳分离RNA,随后通过与目的RNA互补的杂交探针进行对目的RNA的检测。由于核算带负电荷,因此带有正电荷的聚酰胺膜有较高的膜转移效率。并且转移缓冲液常含有甲酰胺,其可降低探针和RNA结合所需温度,因此可降低RNA在高温下变性的风险。RNA转移到膜后,通过UV或加热可与膜进行共价结合。随后加入已标记的探针进行探针和目的RNA的片段的杂交,并进行膜的洗涤以洗去未特异性结合的探针已消除背景。最后,杂交信号可被X-ray检测并且进行定量。

 

操作流程大致如下:

1.        RNA的提取

2.        电泳

3.        将RNA从变性胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜

4.        UV或热固定法将RNA固定到膜上

5.        探针标记

6.        杂交,洗膜

7.        图像分析

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