快速抗体制备服务

抗体的产生，是围绕B淋巴细胞的激活与分化为浆细胞进行的。在shou次免疫过程中，抗原首先经多种兔疫相关淋巴或巨噬细胞吞噬充分暴露抗原,并将抗原呈递给静止B淋巴细胞，以使其活化，活化后的B淋巴细胞转化为浆细胞，也就是抗体的产生者。由于抗原的表面存在多种抗原识别决定簇，因此在经过免疫相关细胞加工后，呈递给B淋巴细胞的抗原决定簇也是多种多样的，理论上，一个B淋巴细胞只接受-种抗原决定簇，产生-种对应与之结合的抗体，多个B淋巴细胞就会产生多种识别抗原不同抗原决定簇(也就是表位)的抗体...

质粒DNA提取实验

在我们的细胞实验中经常会用到质粒DNA，那么具体是怎么来的呢？今天讲的是DNA的提取步骤。前提：细菌繁殖步骤（挑单克隆，置于LB培养基中，置于37℃恒温摇床摇过夜，180-200rpm）。一般市面上有很多试剂盒可供大家使用，大体步骤都差不多的啦~~我按照我所使用的试剂盒（AxyPrep中抽试剂盒）的步骤分享如下：收集1.50ml离心管收集过夜摇菌的LB培养液（此时可以做一下判断，如果液体未变浑浊，说明细菌并未繁殖成功，这样肯定难以提出DNA；如果液体浑浊，便说明细菌繁殖成功啦...

常见问题之蛋白在真核细胞的表达量低？

实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞蛋白表达系统来实现，而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单，快速。如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定，经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象，那么使用原核表达系统就很合适了。有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白是*有可能的。

常见问题之影响蛋白表达因素有哪些？

1.蛋白本身的特性：蛋白分子量大小、蛋白来源/物种、是否为毒性蛋白，蛋白翻译后修饰程度、蛋白自身结构的复杂程度2.宿主的选择：宿主本身的特性、蛋白表达需求等都影响着蛋白表达3.蛋白需求量：蛋白应用范围对应的需求量不同，所以要根据需求量确定表达系统4.质粒载体的选择：载体是携带外源基因的工具，要根据系统选择合适的载体才能使蛋白更好的表达5.融合标签的选择：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋...

常见问题之HIS标签蛋白没有被洗脱下来

蛋白挂柱后洗脱不下来主要是因为蛋白和柱子结合能力太强或者洗脱条件太温和，我们可以从以下几方面考虑解决问题。1、洗脱条件太温和：重新摸索洗脱条件，增加缓冲液中咪唑浓度或者适当降低缓冲液pH以确定最佳的洗脱条件或者更、换缓冲液的成分（换成tris-HCl缓冲液）。2、蛋白在柱子中沉淀：适当降低上样量或蛋白浓度，用咪唑线性洗脱。使用添加剂或者改变NaCl的浓度，或者在变性的条件下洗脱（加4-8M的尿素或者4-6M的盐酸胍）。3、非特异性的疏水或者其他作用：在洗脱液中加非离子的添加剂...

慢病毒构建原理

慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种，基因组是RNA，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。◆慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小...

带你学会一种药物研究利器——等温滴定量热法

等温滴定量热法(IsothermalTitrationCalorimetry,ITC)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法，它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线，原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。ITC检测方式与化学反应中的酸碱滴定法相似，在ITC测定中，首先将一种反应物置于一个温控样品池中，并通过一个热电偶回路与一个参比池相偶联，样品池和参比池处于相同的外部环境。特定的滴定剂（按实验需要选择）定...

NK细胞是属于什么细胞呢？

NK（自然杀伤细胞）通过整合识别MHCI分子的激活和抑制类受体的信号对靶点进行识别，对靶细胞进行直接杀伤，同时不损伤自身健康细胞。人体NK细胞占血液和其他部位中淋巴细胞的5%-20%，含量丰富，在抗病毒和抗肿瘤免疫中发挥关键作用。NK是控制急性和慢性病毒感染所必需的，同时NK能够促进多种肿瘤直接裂解，在不同部位巡逻防止转移。NK细胞功能的多面性显示出其在免疫介导的保护和内环境稳态平衡中具有动态作用。根据CD56和抗体结合Fc受体CD16的表达水平，人类NK可细分为成熟度和功能...