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蛋白定量有哪些方法?

发布时间:2021-12-03   点击次数:161次

蛋白定量的方法有很多种,应用较多的主要有两种:BCA蛋白定量检测法和Bradford蛋白定量检测法,市售的蛋白定量试剂盒也多基于上述两种检测方法而开发的。两种方法均需配制蛋白标准品,蛋白与定量试剂经过一定时间的反应(BCA法反应为37℃、20-30min,Bradford法反应一般为37℃,5min),酶标仪读取样品的OD值,绘制的蛋白标准曲线,依据标准曲线计算WB蛋白的浓度。两种检测方法笔者均有使用经验,相比BCA法,Bradford法不仅节省反应时间,也无需配置反应试剂,简单、快速、好用,笔者推荐Bradford法测定蛋白浓度。

严格来说,每次的蛋白浓度测定均需配制新鲜蛋白标准品,保证每次测到的蛋白浓度的准确性。然而,WB法评估蛋白表达水平本身就是一种半定量或者相对定量,因此在实际蛋白样本准本及浓度测定时只需保证均一性即可,即使用同样的标准曲线计算同一批蛋白的浓度,如果计算准备即可保证蛋白上样时内参水平基本一致。因此,在实际操作中我们只需测定一次标准品的OD值、绘制标准曲线,即可用此曲线来计算后续实验蛋白的浓度,节省时间和试剂。

具体的蛋白定量步骤,各位朋友参考试剂盒提供的方法即可,简单易行。至于标准曲线的绘制,网络亦可查到不是帖子介绍用不同软件绘制标准曲线。

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