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做实验不会制备细胞爬片怎么行?

发布时间:2021-12-01   点击次数:226次

我们在做免疫荧光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡检测(TUNEL)时,免不了要制备细胞爬片,爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。今天,就教大家如何制备好的细胞爬片。



一. 实验材料及试剂

盖玻片、培养板、酒精灯、镊子等;75%乙醇、DMEM完全培养基(RPMI-1640完全培养基)、胰酶等。

二、实验内容

爬片准备:

1、24*24盖玻片,刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片,放在大的培养皿中爬片。

2. 盖玻片泡酸过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了,如果不干净的话,细胞帖壁不好),放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒、烤干。

3.盖玻片浸泡75%乙醇10分钟消毒,然后酒精灯上烤干,直接放入培养皿,开始种细胞。重点是玻片是干净的、无菌的。

4.盖玻片在液体中经常有贴壁吸附力,用一般镊子很难一次性夹起,将注射器针头针尖向背面弄个小钩,这样将爬片轻轻勾起,用小镊子取出就可以。

细胞进行爬片:

1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中(悬浮细胞直接离心)。

2. 加细胞时,根据玻片的大小,先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基,目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起,然后放玻片,防止加细胞悬液时玻片漂起,造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。

3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

保存细胞爬片时,一般用培养皿或避光湿盒,先在皿底放一层面巾纸,然后再放爬片,这样方便做实验时取片。然后盖上盖子,并在盖子上做标记,为避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照没有问题的。制备好的细胞爬片是不是很简单呢?

三、注意事项

1. 使用细胞爬片时(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少)。比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘。

2. 按照实验设计,作用一定时间后取玻片。注意细胞不能太密,否则容易掉片。


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