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ARTICLES1. 基因调取与腺病毒穿梭质粒的构建 针对客户感兴趣的基因,从NCBI网站上得到目的基因CDS区信息并设计引物,从文库中调出基因,克隆至腺病毒系统穿梭载体(Pshuttle-CMV)。如需克隆的为基因突变体,则将基因克隆至穿梭载体后,行若干次点突变,至得到需要的突变体为止。
siRNA表达载体构建可应用于:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)药物靶点筛选、疾病治疗。
质粒构建 流程: 1. 目的基因的PCR扩增 2. PCR产物纯化 3. 载体和PCR产物进行双酶切 4. 胶回收 5. 载体与目的基因的连接 6. 转化 7. 菌落PCR鉴定 8. 重组质粒的抽提
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。
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