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Western Blot实验

简要描述:

蛋白质印迹法(Western Blot)通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的分子生物学技术。

更新时间:2020-05-14

蛋白质印迹法(Western Blot)通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的分子生物学技术。

 

 

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质样品的分离,随后将蛋白转移到硝酸纤维素薄膜上进行固定。固定的目的蛋白即为抗原,因此加入适量的对应抗体进行免疫反应,能与抗体紧密结合的抗原及为目的蛋白。而后加入有标记的二抗或酶,因此结合的抗原-抗体可被检测到。 

WB

大致流程如下:

1.        蛋白质的样品制备

2.        蛋白质定量

3.        蛋白质样品SDS-PAGE电泳

4.        转PVDF膜或硝化纤维膜

5.        免疫杂交反应

6.        化学发光(ECL),显影,定影

7.        凝胶图象分析

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