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抗体制备对血清的采集与保存说明

发布时间:2020-08-18   点击次数:30次
   抗体是机体在抗原刺激下所产生的特异性免疫应答的重要产物,也是免疫学实验中的常用试剂,对于抗原的分析鉴定和定量检测极为重要,在各种免疫学实验室诊断中广泛应用。抗体制备技术发展经历了三个阶段:用纯化抗原免疫动物获得血清的多克隆抗体为一代抗体;用B细胞杂交瘤技术制备的单克隆抗体为第二代抗体;利用基因工程技术制备的基因工程抗体为第三代抗体。有了质量好的抗原,还必须选择适当的免疫途径,才能产生质量好(特异性强和效价高)的抗体。
  我们以家兔为例,家兔是常用以产生抗体的动物,因此主要讨论兔血的收集。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血,鼠等小动物取血可参阅有关资料。取兔血有两种方法:一是耳缘静脉或耳动脉放血,一是颈动脉进血,也可心脏采血。取动脉或静脉放血时,将兔放进一个特造的木匣或笼内,耳露于箱(笼)外,也可由另一人捉住兔身。剪往耳缘的毛,用少许二甲苯涂抹耳廓,30s后,耳血管扩张、充血。用手轻拉耳尖,以单面剃须刀或尖的手术刀片,快速切开动脉或静脉,血液即流出,每次可收集30-40ml。然后用棉球压迫止血,凝血后洗往二甲苯。二星期后,可在另一耳放血。此法可反复多次放血。颈动脉放血时,将兔仰卧,固定于兔台,剪往颈部的毛,切开皮肤,暴露颈动脉,插管放血。放血过程中要严格按无菌要求进行。
  收集的血液置于室温下1h左右,凝固后,置4℃下,过夜(切勿冰冻)析出血清,离心4000rpm,10min。在无菌条件,吸出血清,分装(0.05-0.2ml),贮于-40℃以下冰箱,或冻干后贮存于4℃冰箱保存。
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