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磁珠质粒提取试剂盒

简要描述:

采用优化的 SDS-碱裂解法裂解细胞,高效去除抑制物等杂质,轻基磁珠能在高盐、低 pH值状态下与溶液中的核酸通过疏水作用、氢键作用和静电作用等发生特异性结合,而不与其他杂质(蛋白质)结合,迅速从样品中分离质粒 DNA。纯化的质粒 DNA 可直接用于酶切、PCR、测序、连接、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

更新时间:2023-12-28

使用步骤

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中,12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 uL Buffer PI (已加入 RNase A),使用移液枪或涡旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀,确保无菌块。37C静置 15 min,以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 L Buffer P2,温和上下颠倒混匀 4-6 次,充分混匀使菌体裂解,此时溶液应变得清亮粘稠。

注意:温和地混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min,以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 L Buffer P3,立即温和上下颠倒混匀 8-10 次,充分混匀,此时应出现白色絮状沉淀,12000 rpm 离心 10 min。注意:P3 加入后立即混合,避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮,可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中,加入等体积异丙醇,混匀,加入50 uL 轻基磁珠,颠倒混匀 1 min,室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置,磁珠吸附后,小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下,加入 600 L Buffer Pw (请确认是否加入无水Z醇),混匀 2 min。

注意:加入漂洗液 PW 后,室温静置 2 min,有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置,磁珠吸附后,小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下,加入 600 uL Bufer PW,混匀2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置,磁珠吸附后,弃废液,吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上,室温晾干 15 min。注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾于时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间,以免难以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下,加入 100-200 L 洗脱缓冲液 TB 或 ddHO (洗脱液可在水浴锅中预热),振荡混匀,置于 56C水浴锅中,孵育 10 min,期间每隔2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上,磁珠吸附后,小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心管中,并于-20C保存。


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