磁珠质粒提取试剂盒

使用步骤

1、取 5-10 mL 过夜培养菌液加入离心管中，12000 rpm 离心 2 min 收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 250 uL Buffer PI (已加入 RNase A)，使用移液枪或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀，确保无菌块。37C静置 15 min，以除去 RNA。

3、向离心管中加入 250 L Buffer P2，温和上下颠倒混匀 4-6 次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。

注意:温和地混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入 350 L Buffer P3，立即温和上下颠倒混匀 8-10 次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀，12000 rpm 离心 10 min。注意:P3 加入后立即混合，避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮，可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液转移到新的 2 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，加入50 uL 轻基磁珠，颠倒混匀 1 min，室温放置 2 min。

6、将步骤 5 中的离心管放在磁力架上静置，磁珠吸附后，小心吸去液体。

7、将离心管从将离心管从磁力架上取下，加入 600 L Buffer Pw (请确认是否加入无水Z醇)，混匀 2 min。

注意:加入漂洗液 PW 后，室温静置 2 min，有助于更好的去除杂质。

8、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠吸附后，小心吸去液体。

9、将离心管从磁力架上取下，加入 600 uL Bufer PW，混匀2 min。

10、将离心管放置于磁力架上静置，磁珠吸附后，弃废液，吸尽管底管盖的液体。

11、将离心管置于磁力架上，室温晾干 15 min。注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾于时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱质粒 DNA。

12、将离心管从磁力架上取下，加入 100-200 L 洗脱缓冲液 TB 或 ddHO (洗脱液可在水浴锅中预热)，振荡混匀，置于 56C水浴锅中，孵育 10 min，期间每隔2 min 颠倒混匀。

13、将离心管放置于磁力架上，磁珠吸附后，小心将质粒 DNA 溶液转移至一个新离心管中，并于-20C保存。