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柱式质粒提取试剂盒

产品简介

采用优化的SDS-碱裂解法裂解细胞,高效去除抑制物等杂质,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组DNA、RNA和其他杂质,最后在低盐、高pH的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱,每个吸附柱可吸附高达50μg的质粒DNA。纯化的质粒DNA可直接用于酶切、PCR、测序、转化、转染一些常规的传代细胞等生物学实验。

产品型号:
更新时间:2023-12-28
厂商性质:代理商
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使用步骤

1、取 5-15 mL 过夜培养菌液加入离心管中,12000 pm 离心 1 min 收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入 500 uL Buffer P1 (已加入RNase A),使用移液枪或旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀,混匀至无菌块。

3、向离心管中加入 500 uL Bufcr P2,温和上下颠倒混匀 4-6 次,充分混匀使菌体裂解,此时溶液应变得清亮粘稠。

注意:温和地混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组 DNA。所用时间不应超过 5 min,以免质粒受到破坏

4、向离心管中加入 700 uL Bufer P3,立即温和上下颠倒混匀 8-10 次,充分混匀,此时应

出现白色絮状沉淀,12000 rpm 离心 10 min。注意: P3 加入后立即混合,避免产生局部沉淀。如果离心完仍有沉淀漂浮,可延长离心时间取上清。

5、将步骤 4 中的上清液分批转移到已装入收集管的吸附柱中,12000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。注意:一根吸附柱最大容积为 750 uL,请分两次转移上清液到吸附柱中。

6、向吸附柱中加入 500 uL Bufer PD,12000 rpm 离心 1 min,弃废液。

7、向吸附柱中加入 600 uL Buffer PW (使用前请确认是否加入无水乙醇),12000rpm 离心1 min,弃废液。

注意:加入漂洗液 PW 后,室温静置 2-5 min,有助于更好的去除杂质。

8、重复一次步骤 7。

9、将吸附柱重新放回收集管中,12,000 rpm 离心 2 min,目的是去除吸附柱中残余的漂洗液。注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,确保乙醇挥发干净。

10、将吸附柱放到一个干净灭菌 1.5 L 离心管中,将吸附柱开盖静置数分钟。向吸附膜中间位置悬空滴加 50-100 uL Buffer TE 或 ddHO (可提前放在 5565 C水浴锅中预热,提高质粒 DNA 回收率),室温放置 2 min。12,000 rpm ,离心 2 min 收集质粒 DNA 溶液(若需要获得最高产量,建议将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,重复第 10 步进行二次洗脱。)。

11、质粒溶液保存在- 20C。


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