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免疫共沉淀

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免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation) 是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相
互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

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更新时间:2021-07-08
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免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation) 是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相
互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。

 其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被
保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用
精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads. 上的
prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于
确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
基本流程是:细胞裂解液中加入抗体,与抗原形成特异免疫复合物,经过洗脱,收集免疫复合物,然
后进行SDS-PAGE及Western blotting分析。

 服务流程:
1.构建含有目的基因的表达质粒
2.共转细胞
3.裂解细胞并加入诱饵蛋白的抗体,孵育
4.加入protein A或G以与抗体特异性结合于Agarose珠
5. SDS-PAGE; Western Blot

 

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