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慢病毒转染稳转细胞系构建

简要描述:

慢病毒构建并包装后,以进行贴壁细胞或悬浮细胞的转染。具体流程如下:

1. 对慢病毒基因进行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆转录和整合的能力,但保留产生病毒颗粒必须的蛋白的能力。

2. 向上述基因中插入目的基因。与具有包装功能的质粒同时进行对包装细胞的转染。在细胞上清中获得携带目的基因的复制缺陷型慢病毒载体颗粒。

更新时间:2020-05-14

慢病毒构建并包装后,以进行贴壁细胞或悬浮细胞的转染。具体流程如下:

1.    对慢病毒基因进行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,使其逆转录和整合的能力,但保留产生病毒颗粒必须的蛋白的能力。

2.    向上述基因中插入目的基因。与具有包装功能的质粒同时进行对包装细胞的转染。在细胞上清中获得携带目的基因的复制缺陷型慢病毒载体颗粒。

3.    使用上述获得的慢病毒颗粒转染目的细胞。

4.    根据慢病毒携带的标记基因,转染得到的细胞进行荧光蛋白检测或加入抗生素进行细胞筛选。

5.  荧光性强或者克隆数多的细胞系加以传代培养并保存。

 

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