欢迎来到安诺伦(北京)生物科技有限公司网站!

热门关键词:抗体类,蛋白类,分子细胞类,化学品与试剂

产品中心PRODUCTS
技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > T载体的作用以及克隆时为什么要用T载体?

T载体的作用以及克隆时为什么要用T载体?

发布时间:2021-08-30   点击次数:58次

T载体又叫T质粒载体,是指T4噬菌体DNA连接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的zd载体分子与外源DNA分子进行连接。

DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。

T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应内分为3 步:首先,T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物;然后,酶-ATP复合物再结合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化;最后产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。

形象的说,DNA水解酶相当于剪刀,剪断DNA,而T载体容(DNA连接酶)就相当于针线。如果克隆时不用,就不能将DNA连接起来。

T载体是聚合酶链反应产物的克隆运载体,线性化后两侧3′端各多出一个脱氧胸苷酸(T)。由于PCR产物两侧3′端通常含单个脱氧腺苷酸(A),与T载体之间的A-T互补性可提高PCR产物克隆的效率。


在线客服
电话咨询 18915310964
在线客服