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哺乳动物细胞蛋白表达系统

简要描述:

哺乳动物细胞表达系统的优势$n1. 能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性;$n2. 表达水平高;$n3. 高效启动子控制蛋白表达$n4. 适合大规模蛋白表达。

更新时间:2020-08-27

哺乳动物细胞表达系统的优势

1. 能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性;

2. 表达水平高;

3. 高效启动子控制蛋白表达

4. 适合大规模蛋白表达。

艾伯森生物哺乳表达系统

艾伯森生物提供表达载体构建、瞬时转染、表达测试及大规模动物细胞发酵和蛋白纯化等一站式蛋白技术服务。

 

表达载体:pcDNA 3.1,pIRES,pTT3,pCEP4,pATX1等常规载体以及我司分子技术人员自行合成与后期改造的性载体。

艾伯森生物哺乳表达系统服务内容

1. 载体构建及改进

 1) 可将cDNA克隆至客户或艾伯森生物提供的哺乳细胞的表达载体中;

 2) 可在表达载体中添加分泌信号肽和纯化标签,促进蛋白分泌表达及满足一步亲和纯化的需求;

 3) 能生产并鉴定高效稳定细胞系,适合大规模发酵生产。

2. 稳定基因表达符合长期生存需求。整个实验操作流程提供长期稳定及规模可调的蛋白生产

3. 瞬时表达(TGE)

 1) 与稳定基因表达相比,TGE主要适用于短期内制备重组蛋白,一般在10天内即可快速转染,无需质粒DNA的遗传性选择

 2) 艾柏森生物的瞬时表达使用悬浮细胞,能够完成体积到100L的蛋白表达。

4. 工艺过程开发及扩大规模。艾柏森生物能够优化表达过程以及表达产物,检测细胞表达量,摸索发酵罐发酵条件,适合大规模发酵生产。

5. 纯化。艾伯森生物拥有完整的蛋白纯化系统,亲和纯化,凝胶过滤,离子交换及疏水层析等纯化方法,能够完成带标签与不带标签蛋白的纯化,以及纯化工艺的摸索。

服务流程

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

 

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

经典案例

某生物细胞器基质蛋白,全长334aa,大小37.03kDa,自带Fc标签蛋白,采用293F细胞表达。我们在对其编码基因进行全密码子优化后,把它构建到pTT3载体上,测序验证无误后,进行了30ml体积试表达,如Figure1:

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.Ø. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的最大回收率,我们先后对Flowthrough进行了两次Protein G纯化(Figure2~Figure3),可以看到在第二次纯化后,FT中尚残留的目的蛋白。

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure2. Target protein purification profile.

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

为此我们提高了盐浓度至300mMNaCl,这次洗脱后,FT中剩余的蛋白量显著降低,如Figure4.

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表达摸索清楚成熟的实验条件后,我们进入大体积制备,2L发酵。

哺乳动物细胞蛋白表达系统;Protein Expression in Mamalian Cells

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.

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