哺乳动物细胞蛋白表达系统

哺乳动物细胞表达系统的优势

1. 能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性；

2. 表达水平高；

3. 高效启动子控制蛋白表达

4. 适合大规模蛋白表达。

艾伯森生物哺乳表达系统

艾伯森生物提供表达载体构建、瞬时转染、表达测试及大规模动物细胞发酵和蛋白纯化等一站式蛋白技术服务。

表达载体：pcDNA 3.1，pIRES，pTT3，pCEP4，pATX1等常规载体以及我司分子技术人员自行合成与后期改造的性载体。

艾伯森生物哺乳表达系统服务内容

1. 载体构建及改进

 1) 可将cDNA克隆至客户或艾伯森生物提供的哺乳细胞的表达载体中；

 2) 可在表达载体中添加分泌信号肽和纯化标签，促进蛋白分泌表达及满足一步亲和纯化的需求；

 3) 能生产并鉴定高效稳定细胞系，适合大规模发酵生产。

2. 稳定基因表达符合长期生存需求。整个实验操作流程提供长期稳定及规模可调的蛋白生产

3. 瞬时表达（TGE）

 1) 与稳定基因表达相比，TGE主要适用于短期内制备重组蛋白，一般在10天内即可快速转染，无需质粒DNA的遗传性选择

 2) 艾柏森生物的瞬时表达使用悬浮细胞，能够完成体积到100L的蛋白表达。

4. 工艺过程开发及扩大规模。艾柏森生物能够优化表达过程以及表达产物，检测细胞表达量，摸索发酵罐发酵条件，适合大规模发酵生产。

5. 纯化。艾伯森生物拥有完整的蛋白纯化系统，亲和纯化，凝胶过滤，离子交换及疏水层析等纯化方法，能够完成带标签与不带标签蛋白的纯化，以及纯化工艺的摸索。

服务流程

经典案例

某生物细胞器基质蛋白，全长334aa，大小37.03kDa，自带Fc标签蛋白，采用293F细胞表达。我们在对其编码基因进行全密码子优化后，把它构建到pTT3载体上，测序验证无误后，进行了30ml体积试表达，如Figure1：

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.Ø. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的大回收率，我们先后对Flowthrough进行了两次Protein G纯化（Figure2~Figure3），可以看到在第二次纯化后，FT中尚残留的目的蛋白。

Figure2. Target protein purification profile.

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

为此我们提高了盐浓度至300mMNaCl，这次洗脱后，FT中剩余的蛋白量显著降低，如Figure4.

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表达摸索清楚成熟的实验条件后，我们进入大体积制备，2L发酵。

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.