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兔子单克隆抗体制备

简要描述:

Abiocenter——艾柏森(北京)生物科技有限公司是一家以生命科学前沿领域研究与医药应用、工业化生产一体化为主要业务方向的高新技术服务企业,作为坚持生物技术自主开发的服务提供商,公司在成立5年内便迅速发展壮大,并已持续输出转让了多项生物技术,获得与多家国际知名的生命科学试剂、服务或仪器生产商的成功合作经验。

更新时间:2020-08-27

单克隆抗体制备限于技术保护的原因,目前,全球兔单克隆杂交瘤细胞制备技术被一家公司垄断,所以我们无法通过像类似制备小鼠单克隆抗体那样,制备兔源杂交瘤细胞获得兔源单克隆抗体。为此,公司在一大批免疫学与基因工程学专家的帮助下,先后建立了两套兔源单克隆抗体制备方案。这两种方案均不依赖于兔源骨髓瘤细胞,但是其抗体的种源特性毫无疑问是兔源,在保留兔源单克隆抗体优势的同时,大大压缩试验周期,提高试验成功率。

方案一噬菌体展示技术

M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库,针对特定靶分子进行3-5 轮亲和筛选,可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体,得到相应的DNA序列信息。

艾柏森(北京)生物科技有限公司目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型,可根据客户的特殊需求定制个性化文库,并提供灵活高效的筛选服务。在此技术储备的基础上,我们提供的兔源单克隆抗体噬菌体展示方案,可高效灵活的根据客户需要大规模探测高亲和力抗体,同时结合公司独有的兔源Fc表达质粒,与高效真核表达系统,使得我们的抗体拥有极高的表达效率。

方案二重组抗体制备技术

艾柏森(北京)生物科技开发出一种革命性的单克隆抗体生产技术,使单克隆抗体的生产不sha害动物,不依赖杂交瘤。该技术通过分离培养B细胞,并利用ELISA、Western Blot、IHC(Immunohistochemistry)等方法筛选出抗原特异性B细胞。再通过分子克隆的手段重组表达完整的抗体分子。该技术可用于开发高品质的兔子和小鼠等不同物种的单克隆抗体。

其主要依托技术有:

高效的B细胞体外培养体系

高通量B细胞筛选技术

稳定的VH和VL抗体分子表达体系

高通量的抗体分子测序平台

兔子单克隆抗体制备服务项目

服务项目

(Service Items)

周期(周)

Time(weeks)

方案一:

噬菌体展示技术

(Phage Display)

方案二:

异源表达重组技术

(Heterogeneous Recombination)

多肽

Peptide

小分子

Molecular

磷酸基/甲基/乙基化多肽

Phosphate/Methyl/

acetyl-specific

目前只有针对部分肿瘤相关通路热点分子的抗原,详情请与公司技术人员沟通

多肽设计与合成

Peptide design & synthesis

多肽设计

Peptide design

~2

可选,免费

多肽合成

Peptide synthesis

   

   

小分子或多肽偶联

conjugation

 

 

 

免疫阶段

Immunization

免疫2只兔子

Immunized 2 rabbits

~8

ELISA检测

Elisa detection

cDNA制备

cDNA preparation

逆转录制备cDNA文库

prepare cDNA library by RT-PCR

~1

cDNA 文库质检

cDNA library QC check

构建Fab抗体库

Fab library   construction

VH与VL基因获得

obtained VH and VL   genes

10~15

构建初级抗体库

primary antibody   library construction

构建Fab抗体库

Fab library   construction

噬菌体筛选

phage screening

噬菌体颗粒包装

phage particles package

10~15

 

磁珠亲和筛选

magnetic beads affinity screening

 

阳性克隆回收基因测序

Recover positive clones and DNA sequencing

 

抗体表达

Antibody expression

特异性双链基因合成与Fc基因桥接

synthetic of target   phage gene and Fc gene

~5

构建真核表达载体

Eukaryotic system   expression plasmids construction

真核表达

Eukaryotic system   expression

 

稳转细胞系构建

Stably transfected   cell line construction

     

纯化与检测

Purification and detection

标签纯化

Tag affinity purification

~1

特异性亲和纯化

Antigen specific affinity purification

总周期(月)

Total lead   time(months)

7~9

3~5

                       

注:

单克隆抗体制备价格面议;

请慎重考虑周期事宜,以上时间仅为理想条件下最短周期;

为了缩短试验周期建议考虑自行提供抗原直接免疫做起;

免疫环节设立验收节点,效价合格,取脾脏,效价不合格,终止实验;

抗体库构建步骤启动之前,至少支付此步骤的50%全款;完成项目,支付尾款。

 

单克隆抗体制备服务组合:

客户:提供抗原蛋白信息

制备流程:

1)抗原制备质粒表达蛋白纯化多肽设计合成及交联;

2)免疫:首次免疫兔子2只,失败后又加免3只;

3)ELISA/Western-blot试验监控兔子血清中的抗体效价和特异性,根据ELISA和WB检测,筛选兔子;

4)cDNA文库制备与噬菌体载体构建;

5)磁珠链霉素亲和筛选;

6)阳性克隆测序与基因合成桥接;

7)真核表达质粒构建;

8)稳转细胞构建;

9)试表达鉴定与结果交付;

交付产品(每种抗原,所有兔子总共的)

1)1株针对免疫原特异性的单克隆杂交瘤细胞株

2)1ml(浓度约0.1~1mg/ml)纯化的抗体,Elisa效价应至少1:200以上;

制备时间:3~6个月

兔子单克隆抗体制备成功案例:

Publication: Plos One

IF:3.05

Title:TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral naïve CD8+ T   cell survival and homeostasis in mice.

Name:anti- Tuberin antibody

Species: Mouse

Type:Rabbit Recombination Monoclonal antibody

 

兔子单克隆抗体制备.1.jpg

兔子单克隆抗体制备.2.png

Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.

Recommended constration: 1:200

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