人源重组蛋白抗体原料——博迈伦生物

更新时间：2023-12-01 点击次数：164次

人源重组蛋白抗体是一类广泛应用于医学和生物研究中的重要蛋白质药物。它们是通过基因工程技术将人源基因序列克隆到表达载体中，再在适当的宿主细胞中表达，从而获得具有抗体结构和功能的重组蛋白质。

以下是人源重组蛋白抗体的原料制备和纯化的一般步骤：

1. 基因克隆：选择具有特定抗体活性的人源基因序列，并将其克隆至适当的表达载体中。这通常涉及基于PCR技术扩增相关基因片段，并利用适当的限制酶将其连接到表达载体中。

2. 表达宿主细胞培养：将表达载体导入适当的宿主细胞中，如大肠杆菌、CHO细胞等，并进行细胞培养。培养条件需要提供适当的培养基和生长因子，以确保细胞的适宜生长和目标蛋白质的表达。

3. 抗体表达：一旦细胞培养达到一定密度，可以使用适当的诱导因子（如IPTG）来诱导目标蛋白质的表达。经过一定时间的诱导后，细胞将开始表达目标抗体。

4. 细胞破碎：使用机械或化学方法破碎细胞，以释放细胞内部的目标抗体。这个步骤可以通过离心等方法去除细胞碎片和细胞核等非溶解物质。

5. 亲和层析：利用亲和层析柱，使用与目标抗体特异结合的配体，如蛋白A/G或蛋白L，实现目标抗体的选择性结合。这个步骤可以去除大部分杂质，并在继续纯化过程中提高目标抗体的纯度。

6. 洗脱：经过亲和层析后，通过使用适当的缓冲液或条件改变，将目标抗体从亲和层析柱上洗脱下来。这个步骤有助于去除不需要的成分和与抗体结合的杂质。

7. 浓缩与纯化：将洗脱得到的目标抗体通过浓缩技术（如超滤或离心浓缩）浓缩为较小的体积，并除去溶剂。然后可以使用其他纯化技术，如离子交换层析、凝胶过滤、透析等，进一步纯化。

8. 分析和鉴定：通过使用技术如SDS-PAGE、Western blot、质谱等，对纯化的抗体进行鉴定。这些技术可以评估抗体的分子量、纯度、亚型和抗原结合特性。

返回列表>>