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噬菌体筛选方法你知道吗?

发布时间:2021-12-28   点击次数:66次
  噬菌体筛选是一项高通量地淘选具有特定结合能力的多肽或抗体的分子生物学技术,也是目前抗体药筛选过程中使用非常广泛的一种技术平台。噬菌体展示技术可对人和其他动物的B细胞抗体库进行体外建库筛选,避开了免疫和细胞融合等步骤,从而缩短了实验周期并降低了鼠源抗体的免疫原性。
  噬菌体筛选步骤:
  将经过诱变和加热处理的生产菌株孢子或细胞悬浮液0.5ml涂布到生产菌株的平板培养基上,表面干燥后加入0.1ml保存的噬菌体原液,涂布均匀后置适温下培养48~72h,观察噬菌斑的形成并计数(如无噬菌体原液,也可用噬菌斑制成悬浮液)。将未经诱变但经加热处理的生产菌株孢子或细胞悬浮液按上述步骤操作,观察噬菌斑的形成并计数。将未经诱变和加热处理的生产菌株孢子或细胞悬浮液按上述步骤操作,观察噬菌斑的形成并计数。
  比较三者计数结果,确定噬菌体的加热死亡率和诱变后的抗性率。盐酸羟胺的后续处理盐酸羟胺有促进溶原性噬菌体释放的作用,因此可在以上育种步骤中增加盐酸羟胺后续处理一步。将以上噬菌体抗性检测活性高的抗性悬浮液分离到含盐酸羟胶0.5%~5%的生产菌株平板分离培养基上,在适温下培养48~96h至生成单菌落。
  将分离的单菌落制成细胞悬浮液,60~80℃下处理5~15min,在不含盐酸羟胺的生产菌株平板分离培养基上进行二次分离。将二次分离得到的单菌落接种斜面,进行生产能力和抗性检测。高产抗噬菌体菌株的的筛选按常规方法对抗性菌株进行摇瓶发酵试验或其他方法生产能力检测,筛选高产菌株。
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