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抗CD44纳米抗体制备与鉴定

发布时间:2021-11-25   点击次数:246次
  急性髓系白血病(AML)是一种异质性血液癌症,目前主要的治疗方法是化疗和骨髓干细胞移植,但化疗的特异性和配型的成功率均较低,因而患者的治愈者并不高。基于此,已有对于AML治疗的新型小分子靶向药物和免疫靶向药物的研究,可通过靶向AML细胞提高患者的治愈者和整体生存率。研究表明,CD44在AML细胞表面高表达,且参与AML干细胞的发生和发展,并已有靶向AML细胞表面分子CD44的治疗性抗体的研究。但是,传统单克隆抗体制备过程繁琐,且人源化过程复杂,故难以将理论研究转化到实际应用。因此,本课题选择CD44作为靶标,并筛选易人源化的纳米抗体,为进一步研制新一代治疗AML的靶向性药物奠定基础。
  抗CD44纳米抗体制备研究方法:
  1.CD44胞外结构域抗原的制备:构建CD44原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21菌株中,通过包涵体复性的方式制备抗原,并进行SDS-PAGE和ELISA分析。
  2.抗CD44纳米抗体的噬菌体文库构建:将表达的CD44抗原对健康双峰驼进行免疫,通过细胞分离,总RNA提取以及PCR等方法将编码纳米抗体的核酸序列连接到噬菌体载体上,构建抗CD44纳米抗体的噬菌体文库。
  3.抗CD44纳米抗体的筛选:利用噬菌体展示纳米抗体和固相抗原的结合,通过数轮的“结合-洗脱-结合”后富集特异性结合的噬菌体,之后进行菌液ELISA和序列分析,从而获得抗CD44的纳米抗体。
  4.抗CD44纳米抗体的表达纯化以及特异性和活性的初步研究:构建抗CD44纳米抗体的表达载体,转化到大肠杆菌WK6菌株中,经过镍亲和层析和分子筛进行纯化;通过ELISA方法对抗CD44纳米抗体的特异性和活性进行初步鉴定。
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