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稳定细胞系构建

简要描述:

与瞬时转染不同,稳定细胞系是指外源基因进入受体细胞,并整合到细胞的染色体上,使得宿主可以长期表达目的基因。稳定细胞系表达蛋白(抗体)的稳定性更好,批次间差异也更小,然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作——艾柏森专业的生物医药研发服务机构,拥有丰富的哺乳动物细胞培养经验,基于公司多样的成熟平台,为您提供优质的稳定细胞系构建服务。

更新时间:2020-05-12

服务简介:

与瞬时转染不同,稳定细胞系是指外源基因进入受体细胞,并整合到细胞的染色体上,使得宿主可以长期表达目的基因。稳定细胞系表达蛋白(抗体)的稳定性更好,批次间差异也更小,然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作——艾柏森专业的生物医药研发服务机构,拥有丰富的哺乳动物细胞培养经验,基于公司多样的成熟平台,为您提供优质的稳定细胞系构建服务。

本公司服务包括但不限于下列服务项目:
1、基因过表达稳转细胞细胞系构建服务(基因过表达多克隆细胞株构建服务、基因过表达单克隆细胞株构建服务):

因过表达细胞株构建服务包括目的基因过表达慢病毒载体构建、病毒包装、细胞转染和筛选。您只需提供目的基因的cDNA质粒和需要构建的细胞系,我们将按照您的要求完成目的基因过表达细胞株的构建和检测,提供给您高质量的基因过表达稳定细胞株。
2、RNA干扰基因敲减稳转细胞株筛选服务(RNA干扰基因敲减细胞株多克隆构建服务、RNA干扰基因敲减细胞株单克隆构建服务):

艾柏森的RNA干扰基因敲减细胞系构建基于慢病毒表达系统,一般采用U6启动子驱动的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro载体构建RNA干扰稳定细胞株,服务内容包括干扰载体构建、靶点筛选、干扰效率验证及稳定细胞筛选和克隆。

3、CRISPR基因敲除稳定细胞株构建服务:

随着talen和Cas9/gRNA基因敲除系统的出现,基因定点敲除的难度大幅下降。全新的技术将基因敲除从价格高昂,耗时漫长的ZNF系统,逐渐变成简便的研究工具。现在我们可提供Talen和Cas9/gRNA两个系统的基因敲除服务。包括基因敲除靶点设计,talen质粒组装,Cas9/gRNA质粒构建及基因敲除效率验证。

 

稳定细胞系构建.jpg

 

稳定转染细胞株服务流程:
a、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上。
b、细胞筛选浓度测定:以10-14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
c、细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到60%-80%覆盖。
d、细胞转染:用构建好的载体转染目的细胞。
e、使用抗生素对细胞进行筛选。
f、筛选结果鉴定;

稳定细胞株筛选方法:

1、转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系:对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达,如果转染效率达到40%,基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验,对转染效率要求远远高于基因过表达,通常质粒转染无法满足。

另外,质粒游离于细胞质中,很快降解,无法满足较长时间的检测项目;质粒转染整合几率极低,稳定细胞株构建耗时耗力,且得率很低,往往需要挑取单克隆株。
2、病毒感染筛选稳定细胞株:病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株,由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广,感染效率高,且与细胞染色体整合而不发生基因重排,是制备稳定细胞株的理想载体。 
服务优势:
1、稳定:保证15代以内稳定转染细胞稳定表达。
2、迅速:一般控制在1个月以内完成构建。
3、经济:价格实惠,性价比高。
4、质量保证:对外源基因进行严格鉴定。

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