杂交瘤细胞系

双特异性抗体（bispecificantibody,BsAb）,拥有两个不同的抗原结合位点，从而同时与两个靶抗原结合，在发挥抗体靶向性的同时，介导另外一种特殊的功能，例如一个结合靶细胞上的特异抗原，另一个结合淋巴细胞或者吞噬细胞等效应细胞，从而在肿瘤诊断及治疗过程中发挥传统抗体*的优势。双特异性抗体是一种工程化的抗体类蛋白产物，在自然情况下是不会产生的，只能通过化学或者生物学的方法来制备，利用DNA重组及细胞融合的技术来实现。通过杂交瘤细胞系来制备双特异性抗体是早使用的一种方法，在目前也常用来制备单克隆抗体药物开发。但是这种技术有天然的缺陷，由于重链和轻链的随机重组，两种针对不同抗原的抗体重组有以下10种形式，但只有一种是需要的。

艾柏森生物提供双特异性抗体定制服务，可以满足客户不同的需求。

技术流程

1.　选择标记物的引入：杂交瘤细胞系需要引入突变以便筛选。HAT敏感的杂交瘤细胞能在含有8-氮鸟嘌呤药物的培养基中存活。

2.　流式细胞仪筛选杂交瘤细胞

3.　细胞融合：使用聚乙二醇或者电诱导细胞融合。

4.　从杂交瘤培养液中筛选特异性抗体：ELISA，流式细胞仪和细胞毒性是常用的筛选方法

5.　克隆：筛选稳定分泌bsAb的细胞系，再进行单克隆细胞培养，常用的方法为有限稀释法。

6.　双特异性抗体的纯化：通常使用蛋白A或蛋白G亲和色谱法与离子交换色谱或排阻色谱合并来纯化双特异性抗体，bsAb的纯度可以通过SDS-PAGE，等电聚焦，Western-blot，同型特异性的ELISA来评估。