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噬菌体展示抗体文库服务

简要描述:

M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。

更新时间:2020-05-09

噬菌体展示技术服务平台

   M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库,针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选,可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体,得到相应的 DNA序列信息。

  艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型,可根据客户的特殊需求定制个性化文库,并提供灵活高效的筛选服务。

噬菌体展示服务简介

   M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库,针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选,可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体,得到相应的 DNA序列信息。

  艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型,可根据客户的特殊需求定制个性化文库,并提供灵活高效的筛选服务。

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

 

艾柏森生物平台系统主要包括pComb3噬菌体展示系统和pCANTAB5e噬菌体展示系统:

★  pComb3噬菌体展示技术流程

1>  抗体基因库的获得:收集目标抗体宿主的免疫细胞,提取细胞总RNA;反转录后,使用多对引物分别扩增VH-CH1抗体基因片段和VL-CL1抗体基因片段;

2>  抗体基因库转化大肠杆菌:将以上扩增的抗体基因库连接至pComb3质粒,随后电转化大肠杆菌XL12 Blue;同时鉴定基因库库容(及抗体基因的插入率);

3>  噬菌体Fab抗体库的构建:将辅助噬菌体VCSM13加入到转入了抗体基因的,生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救;培养过夜后,离心收集上清即获得噬菌体Fab抗体库;

4>  抗体库的滴度测定:取少量上述获得的噬菌体Fab抗体库,梯度稀释后进行噬斑培养实验,观察噬斑生长情况以判断噬菌体Fab抗体库的滴度;

5>  噬菌体抗体库的富集筛选:使用靶标抗原包被酶联板,加入噬菌体抗体进行孵育,随后进行洗板、洗脱;将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后,再次感染细菌,并进行第二轮的淘洗;共进行3轮淘洗,每一轮洗脱后都进行滴度测定;最后一轮筛选时,设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

 

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

图1 pComb3噬菌体展示技术流程

 

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

 

图2 噬菌粒载体pComb3遗传图谱

 

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

 

图3 辅助噬菌体VCSM13遗传图谱

★  pCANTAB5e噬菌体展示技术流程

1>  ScFv基因库的获得:收集目标抗体宿主的免疫细胞,提取细胞总RNA;反转录后,使用多对引物分别扩增抗体基因VH和VL,纯化回收VH和VL片段后,使用Linker引物将全套VH和VL基因随机拼接成ScFv基因库;

2>  ScFv基因库转化大肠杆菌:将全套 ScFv 基因片段连接至pCANTAB5e载体,随后电转化大肠杆菌TG1;同时鉴定ScFv基因库库容(及基因的插入率);

3>  噬菌体ScFv抗体库的构建:将辅助噬菌体M13K07加入到转入了ScFv抗体基因的,生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救;培养过夜后,离心收集上清即获得噬菌体ScFv抗体库;

4>  抗体库的滴度测定:取少量上述获得的噬菌体ScFv抗体库,梯度稀释后进行噬斑培养实验,观察噬斑生长情况以判断噬菌体ScFv抗体库的滴度;

5>  噬菌体抗体库的富集筛选:使用靶标抗原包被酶联板,加入噬菌体抗体进行孵育,随后进行洗板、洗脱;将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后,再次感染细菌,并进行第二轮的淘洗;共进行3轮淘洗,每一轮洗脱后都进行滴度测定;最后一轮筛选时,设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

 

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

 

图1 pCANTAB5e噬菌体展示技术流程

 

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

 

 

图2 噬菌粒载体pCANTAB5e遗传图谱

 

Phage Display & Antibody Library Services; 噬菌体展示&抗体文库服务

 

图3 辅助噬菌体M13K07遗传图谱

噬菌体展示技术服务项目

表1 噬菌体展示技术服务项目:噬菌体展示抗体库构建

 

服务描述

服务周期

价格

cDNA 合成

免疫细胞收集,总RNA提取,反转录合成cDNA。

1周

¥98000

质粒构建

以以上cDNA为模板,  PCR扩增抗体基因片段,并连接至载体 (例如:pComb3或pCANTAB5e载体) 。

4周

转化

将已构建好的载体电转化至大肠杆菌菌株。

1周

库容鉴定

(1)以上转化菌株复苏后,梯度稀释,并涂布平板,计算阳性克隆数; (2)挑选10个阳性单克隆,提取质粒后,进行酶切验证; (3)通过阳性克隆数和酶切验证的结果,计算抗体库库容。

抗体库生产

通过辅助噬菌粒拯救获得噬菌体展示抗体库。

1周

运输

低温(干冰)运输。

N/A

免费

总计:

2-3月

¥98000

注:项目启动后,客户需支付80%的预付款。

 

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