噬菌体筛选是广泛的高通量抗体发现的筛选方法，其实质是亲和力测定方法的一种变种，其目的是需要建立ELISA信号值和样品亲和力大小之间的正相关性。相对于采用ELISA进行抗体的亲和力测定方法，用于杂交瘤和噬菌体展示筛选的ELISA方法有以下难点：
1.待测样本多样性，且单一样品通常也是混合物，有很大的可能存在非特异吸附；
2.不同的待测样品之间可能存在较大的浓度差异，浓度的大小和亲和力的大小均会对检测结果产生影响。在进行杂交瘤和噬菌体展示筛选方法开发时，需要选择合适的条件使信号值主要能够表征亲和力的大小而一定程度上忽略浓度差异造成的影响。
噬菌体筛选实验步骤：
1.将每轮筛选洗脱的噬菌体用来感染新鲜的XLIBlu菌，以10μl、20μl等不同量菌液涂于LB氨苄青霉素平皿，37℃4~5h。
2.事先将硝酸纤维素膜在5mmol/L的IPTG溶液中浸泡10min，在超净台中晾干后，铺在上述涂有细菌的平皿中，注意膜面与平皿中培养基界面应无气泡。
3.置30℃过夜培养，一般约15~16h。
4.作好标记，轻轻地将硝酸纤维素膜揭开，用氯仿熏蒸固定15min。
5.将膜置于溶菌酶缓冲液中(50mmol/LTrispH值8.0，150mmol/LNaCl，5mmol/LMgCl2，BSA3g，溶菌酶40mg，100UDNAase)，每张膜用20~25ml缓冲液，置平皿于小型摇床中，室温阻断1h。
6.换上述新鲜阻断缓冲液，室温反应1h。
7.对硝酸纤维素膜进行免疫酶染，方法如常规方法，根据实验需要可选择以下几种策略：
1)辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)直接标记抗原蛋白检测；
2)用HRP或AP标记的抗人或抗鼠Fab抗体检测；
3)加入特异性抗原步骤一，加酶标单克隆抗体或抗血清步骤二；
4)加入特异性抗原步骤一，加单克隆抗体或抗血清步骤二，加酶标二抗步骤三。
根据实验需求而决定，策略2)比较简单，但仅是针对Fab抗体的检测，挑到表达Fab抗体的阳性克隆后需进一步鉴定是否有某种抗原特异性。
8.对照硝酸纤维膜与相应平皿，挑取单个阳性克隆，置4mlSBA培养基中，37℃振荡培养过夜，菌液留作菌种，以备后用。
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