多抗制备基于机体免疫系统对抗原的识别和免疫应答过程

　　多克隆抗体(polyclonal antibody，多抗)是由多种不同的 B 细胞克隆针对抗原物质产生的多样化抗体混合物。多抗制备主要基于机体免疫系统对抗原的识别和免疫应答过程。
 

　　当将抗原物质注入动物体(如小鼠、大鼠、兔子等)后，动物的免疫系统会被激活。抗原呈递细胞(如树突状细胞)会摄取、加工抗原，并将其呈递给辅助性 T 细胞。辅助性 T 细胞被激活后，会释放细胞因子，刺激 B 细胞的增殖和分化。B 细胞表面的 B 细胞受体能够特异性地识别抗原的不同表位。每一个 B 细胞克隆只能识别抗原上的一种特定表位，在抗原的刺激以及辅助性 T 细胞的辅助下，这些 B 细胞会大量增殖并分化为浆细胞。浆细胞则可以分泌针对相应表位的抗体，这些来自不同 B 细胞克隆的抗体混合在一起，就形成了多克隆抗体。
 

　　由于抗原通常具有多个不同的表位，所以能够引发机体产生针对多个表位的抗体。这些抗体在特异性、亲和力等方面存在差异，但共同作用于抗原，可以从不同角度对抗原进行识别和结合，从而实现对抗原的检测、定位或中和等功能。

 

　　多抗制备的测定步骤：
 

　　1.抗原准备：选择合适的抗原，如纯化蛋白、肽段、重组抗原等，确保其纯度和免疫原性。
 

　　2.免疫动物：
 

　　-选择动物：通常选用兔子、山羊等，兔子是多抗制备的，因其体积大，每次可抽取较多血清，且反应良好。
 

　　-初次免疫：将抗原与弗氏佐剂等比例混合，充分乳化后，在动物背部多点皮下注射或肌肉注射。
 

　　-加强免疫：初次免疫后间隔一定时间(如2~4周)，用抗原与弗氏佐剂乳化后进行多次加强免疫，以提高抗体效价。
 

　　3.采血与血清分离：
 

　　-采血：在免疫过程中定期采血，检测抗体效价。采血可在加强免疫后达到预期效价时进行，可采用颈动脉放血等方式获取大量抗血清。
 

　　-血清分离：采集的血液在37℃烘箱放置一段时间后，转移到4℃沉淀过夜，离心后收集上清即为血清，也可自然析出血清。
 

　　4.抗体纯化：
 

　　-亲和纯化：如蛋白A/G亲和纯化可富集免疫球蛋白G(IgG)，除去大量非特异性蛋白，但可能仍有非特异性IgG残留；抗原特异性亲和纯化可进一步去除非特异性IgG组分，富集特异性免疫球蛋白。
 

　　-其他纯化方法：还可结合离子交换层析、凝胶过滤层析等方法提高抗体纯度。
 

　　5.抗体鉴定：
 

　　-效价测定：常用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价，即将抗体倍比稀释后与抗原反应，通过检测吸光值确定效价。
 

　　-特异性检测：可通过免疫印迹(Western Blot)、免疫组织化学等方法检测抗体对目标抗原的特异性识别能力。