免疫原是单抗制备的关键要素

　　免疫原是单抗制备的关键要素，其选择需依据目标抗体的特异性和重要性。常用的免疫原包括蛋白质、多肽、多糖、细胞表面分子等。为增强免疫原性，通常会将免疫原与佐剂混合，以提升其在免疫过程中的刺激效果。
 

　　动物免疫的目的在于使动物(如小鼠、大鼠等)产生针对目标抗原的免疫反应。将选定的免疫原与佐剂充分混合后，通过特定的注射途径(如腹腔注射、皮下注射等)注入动物体内。在初次免疫后的一段时间内，还需进行多次加强免疫，以确保动物体内能产生足够数量和高亲和力的特异性抗体分泌B细胞。
 

　　在动物免疫达到预期效果后，提取动物脾脏中的B淋巴细胞。这些B淋巴细胞能够分泌针对目标抗原的特异性抗体，但由于其本身不能在体外长期存活和增殖，需要与骨髓瘤细胞进行融合。骨髓瘤细胞具有无限增殖的特性，通过融合剂的作用，使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。这种融合技术基于细胞膜的流动性和细胞的自我修复能力，形成的杂交瘤细胞既具备B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力，又拥有骨髓瘤细胞的无限增殖特性。

 

　　单抗制备的注意事项：
 

　　1.储存与运输：
 

　　-单抗应储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融；运输时需保持低温并避光。
 

　　-长期保存可添加BSA或甘油作为保护剂，防止蛋白变性。
 

　　2.操作规范：
 

　　-实验过程中需严格无菌操作，避免微生物污染；使用一次性耗材减少交叉污染风险。
 

　　-单抗稀释时应使用PBS或专用稀释液，避免使用含叠氮钠(NaN3)的缓冲液。
 

　　3.安全性与伦理：
 

　　-动物实验需遵循“替代、减少、优化”原则，减少免疫动物的痛苦。
 

　　-临床级单抗需通过病毒灭活和去除内毒素处理，确保安全性。
 

　　4.应用限制：
 

　　-单抗可能存在物种交叉反应性差异，使用前需验证其与目标物种的兼容性。
 

　　-治疗性单抗需监测免疫原性(如HAMA反应)，避免引起人体免疫排斥。
 

　　5.质量控制：
 

　　-每批单抗需进行效价、纯度、活性等关键指标的检测，确保批次间一致性。
 

　　-腹水来源的单抗需去除杂蛋白(如小鼠IgG)，并通过亲和层析纯化。