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技术服务|噬菌体展示&抗体文库服务

发布时间:2021-08-11   点击次数:72次

噬菌体展示技术服务平台

M1 3单链丝状噬菌体展示系统是目前应用最广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体llI蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库,针对特定靶分子进行3- 5轮亲和筛选,可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体,得到相应的DNA序列信息.


艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型,可根据客户的特殊需求定制个性化文库,并提供灵活高效的筛选服务。

噬菌体展示服务简介

M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用最广泛的文库展示系统,通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体plII蛋白融合表达,使之参与噬菌体组装,并展示在噬菌体表面,形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库,针对特定靶分子进行3- 5轮亲和筛选,可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体,得到相应的DNA序列信息。


艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型,可根据客户的特殊需求定制个性化文库,并提供灵活高效的筛选服务。

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艾柏森生物平台系统主要包括pComb3噬菌体展示系统和pCANTAB5e噬菌体展示系统:

★pComb3噬菌体展示技术流程

1>抗体基因库的获得:收集目标抗体宿主的免疫细胞,提取细胞总RNA;反转录后,使用多对引物分别扩增VH-CH1抗体基因片段和VL-CL1抗体基因片段; .


2>抗体基因库转化大肠杆菌:将以上扩增的抗体基因库连接至pComb3质粒,随后电转化大肠杆菌XL12 Blue;同时鉴定基因库库容(及抗体基因的插入率) ;


3>噬菌体Fab抗体库的构建:将辅助噬菌体VCSM13加入到转入了抗体基因的,生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救;培养过夜后,离心收集上清即获得噬菌体Fab抗体库;


4>抗体库的滴度测定:取少量上述获得的噬菌体Fab抗体库,梯度稀释后进行噬斑培养实验,观察噬斑生长情况以判断噬菌体F ab抗体库的滴度;


5>噬菌体抗体库的富集筛选:使用靶标抗原包被酶联板,加入噬菌体抗体进行孵育,随后进行洗板、洗脱;将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后,再次感染细菌,并进行第二轮的淘洗;共进行3轮淘洗,每轮洗脱后都进行滴度测定; 最后-轮筛选时,设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

图1 pComb3噬菌体展示技术流程

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图2噬菌粒载体pComb3遗传图谱

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图3辅助噬菌体VCSM1 3遗传图谱


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