免疫荧光实验

免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种，抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体上标记荧光基因，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或者组织内的相应抗原（或抗体）利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织从而确定抗原或抗体的性质和定位基本流程

1.细胞准备。对单层生长细胞，在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待
细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次;对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，PBS离心洗涤
(1000rpm,5min) 2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片
2.定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞。定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4°C保存3个
月。PBS洗涤3x5 min
3.通透。使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞，一般需要 在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理,
以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透
后用PBS洗涤3x5 min
4.封闭。使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min
5.一抗结合。室温孵育1h或者4°C过夜。 PBST漂洗3次， 每次冲洗5min
6.二抗结合。间接兔疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次冲洗5min后，用蒸馏
水漂洗-次
7.封片及检测。滴加封片剂- -滴， 封片，荧光显微镜检查