scFV/Fab构建

技术背景：

单链抗体（single-chian variable fragment，scFv），是由抗体重链的可变区与轻链的可变区在一段肽链连接下构成的小分子，是具有抗体活性的小结构功能结构单位；单链抗体可以由表达系统进行表达，也可以用噬菌体展示技术进行制备，由于其分子量小，穿透力强，半衰期短，免于抗原性低等等特点，所以在临床诊断，治疗，预防方面有重要作用和广阔的应用前景，本文就单链抗体结构，制备，应用等方面做一个概述。

scFv结构，完整的抗体由两条重链和两条轻链构成，透过人工改造，可使其直接表达可变区，通过人工合成的链接肽基因将抗体重链可变区和轻链可变区连接成重组基因，由该重组基因表达的抗体就称之为单恋抗体，结构上，可将重链的N端与轻链的C端相连，也可以将轻链的N端与重链的C端相连，链接肽长度通常为15-25个氨基酸，通常由甘氨酸和丝氨酸构成，具有一定的弹性以及蛋白酶抗性，作用是链接重链轻链，并且保持一定的弹性，使重链轻链结合后仍然可以配对，构成单价抗原结合位点。

Fab片段（Fragment of antigen binding）也叫做抗原结合片段，是抗体结构筑龙可以与抗原结合的区域，由一条完整的轻链与重链的VH与CH1结构域组成，分子量约为5X104   轻链与重链均存在一个恒定区与可变区，轻重链之间存在二硫键链接。目前Fab抗体可以在实验室中制备出来。

技术简介：

单链抗体的制备：

scFv可在多个表达系统中进行表达，目前比较常用的，是大肠杆菌表达系统和哺乳动物表达系统。

另外可以使用噬菌体展示技术生产得到scFv片段，通过免疫动物得到杂交瘤细胞，从中提取cDNA，利用逆转录PCR得到全套抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL，利用重叠PCR将VH和VL片段扩增得到可变区基因片段，然后将基因克隆到噬菌体载体中了，电转感受态大肠杆菌，辅助噬菌体超染，得到的上清液即为单链抗体库，以抗原为固相，经过3-5轮吸附-洗脱-扩增筛选，即可得到单链抗体。

Fab片段的制备：

目前有酶解法、利用表达系统制备以及利用噬菌体展示技术进行抗体库筛选等方法进行Fab片段的制备。

酶解法：通常用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等对免疫球蛋白G进行降解，得到Fab，Fc片段等产物；

利用表达系统生产Fab片段：通常利用大肠杆菌表达系统与哺乳动物动物表达系统；大肠杆菌表达系统具有生产成本低，生产速度快等优点，但是容易形成包涵体，复性后活性难以保证活性；用哺乳动物表达，可以顺利形成二硫键；更接近天然Fab结构，活性也更好；

噬菌体展示技术：制备Fab片段抗体库，可经过熟轮的筛选富集，即可得到高亲和性的抗体。

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