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单克隆抗体的制备过程与原理

更新时间:2023-01-12点击次数:537
  单克隆抗体制备它常用于小量培养到大规模培养的过渡阶段,通过转瓶不断旋转使细胞呈悬浮状态,在培养瓶中均匀分布,充分利用养分,并扩大气液接触面,便于氧气的传递。而工业化、商业化大规模悬浮培养多采用生物反应器,其深层培养可分为分批式、流加式、连续式和灌注式等。培养法是应用一种对细胞无害的颗粒作为细胞生长的介质,细胞附着于其表面生长,在持续搅动作用下微载体悬浮于培养液中。
 
  单克隆抗体制备过程与原理:
 
  1、免疫动物
 
  免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
 
  2、细胞融合
 
  采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
 
  3、选择性培养
 
  选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。
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