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噬菌体筛选是一种衣壳蛋白融合的表达

发布时间:2021-09-09   点击次数:21次
  噬菌体筛选它将外源多肽或蛋白与噬菌体的一种衣壳蛋白融合表达,融合蛋白将展示在病毒颗粒的表面,而编码这个融合子的DNA则位于该病毒粒子内。噬菌体展示技术使大量随机多肽与其DNA编码序列之间建立了直接联系,使得各种靶分子(抗体、酶、细胞表面受体等)的多肽配体通过一种被称为淘选(panning)的体外选择程序得以快速鉴定。简单的淘选程序,是将噬菌体展示肽库与包被有目的靶分子的平板(或磁珠)共温育,先洗去未结合噬菌体,然后洗脱特异性结合的噬菌体。被洗脱的噬菌体进行扩增,然后再进行下一轮的结合/扩增循环,以富集那些可结合序列。经3-4轮淘选后,通过DNA测序对每个可结合克隆进行定性。
  噬菌体筛选展示在噬菌体表面的随机肽库可应用于许多方面,包括绘制抗原表位图谱、研究蛋白质-蛋白质相互作用和鉴定非肽配体的肽模拟型。生物活性肽分子的鉴定可以通过对固定在平板上的纯化受体进行淘选也可以在完整细胞上进行淘选。蛋白酶底物的鉴定可通过在随机肽区域的上游加一段亲和tag,然后选用特异性的介质来区分切割和未切割的噬菌体。另外,大的蛋白质分子[如:抗体、激素、蛋白酶抑制剂、酶和结合蛋白也可展示在噬菌体上,通过对随机突变文库的筛选,分离出各种具有亲和力或特异性改变的变异株。
  Ph.D.-12噬菌体展示肽库试剂盒将随机十二肽融合到M13噬菌体次要衣壳蛋白(pIII)上,因而是一个组合文库。所展示的十二肽表达在pIII的N末端,即:成熟蛋白的一个氨基酸就是随机十二肽的一个氨基酸,十二肽后面是一段短小的间隔多肽,由Gly-Gly-Gly-Ser组成,然后是野生型pIII蛋白。该文库含有~2.7×10个电转化序列,用10u1本品提供的噬菌体进行扩增,每个序列一次可产生55个拷贝,对原始文库进行大量测序(见附录)表明该文库序列具有广泛的多样性,无明显的残基位置偏嗜。建议不要扩增原始文库来进行另外的淘选试验,因为一旦再扩增便会出现序列偏嗜现象。
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