单抗制备可进行大规模的扩增培养

　　单抗制备对于筛选得到的阳性克隆，进行大规模的扩增培养，以获得足够数量的杂交瘤细胞。这些细胞可以在体外培养或注射到动物体内(如小鼠腹腔)进行繁殖。在动物体内生产单抗时，杂交瘤细胞会在腹腔内增殖并产生含有大量单抗的腹水。
 

　　从培养上清或腹水中收集到的单抗粗制品中，通常含有其他杂质蛋白、细胞碎片等。因此，需要通过一系列的纯化步骤来获取高纯度的单抗。常用的纯化方法包括蛋白A亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。这些方法基于单抗与其他杂质在物理化学性质上的差异，逐步去除杂质，提高单抗的纯度。
 

　　由于细胞融合是一个随机过程，得到的杂交瘤细胞是多种细胞的混合体，因此需要进行克隆筛选。将融合后的细胞接种于含有选择性培养基的培养板中，只有杂交瘤细胞能够在这种培养基中存活和增殖。然后，通过有限稀释法或其他克隆化方法，将单个杂交瘤细胞分离出来，使其在培养基中增殖形成单个克隆。接着，采用ELISA等方法检测每个克隆培养上清中的抗体，筛选出能够分泌所需特异性单抗的阳性克隆。
 

　　对纯化后的单抗进行质量鉴定是确保其质量和安全性的重要环节。鉴定内容包括单抗的纯度、浓度、效价、特异性、亲和力、生物学活性等。通过SDS-PAGE电泳、HPLC分析等方法检测单抗的纯度；利用ELISA、RIA等方法测定单抗的效价和特异性；通过细胞活性实验、动物模型等评估单抗的生物学活性。
 

　　单抗制备步骤：
 

　　-抗原纯度检测：使用SDS-PAGE、Western blot等技术确认抗原纯度，确保无杂蛋白干扰。
 

　　-抗原活性验证：通过ELISA、免疫荧光等方法检测抗原与抗体结合能力，确认其免疫原性。
 

　　-血清效价测定：采用间接ELISA法检测免疫动物血清中抗体效价，通常以血清稀释倍数达到1:10,000以上为理想。
 

　　-抗体特异性检测：通过Western blot或免疫组化验证抗体对目标抗原的特异性结合。
 

　　-融合率计算：统计融合后存活的杂交瘤细胞比例，理想融合率应高于80。
 

　　-有限稀释法克隆：通过有限稀释法对杂交瘤细胞进行亚克隆，确保单克隆性。
 

　　-抗体分泌稳定性检测：连续传代观察杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性，排除不稳定细胞系。