欢迎来到安诺伦(北京)生物科技有限公司网站!

热门关键词:抗体类,蛋白类,分子细胞类,化学品与试剂

产品中心PRODUCTS
技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 浅析单抗制备的简要过程

浅析单抗制备的简要过程

更新时间:2023-02-10   点击次数:310次
  单抗制备是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的,因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇,所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体,仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而,常规血清抗体又称多克隆抗体(polyclonalantibody),简称多抗。
 
  由于常规抗体的多克隆性质,加之不同批次的抗体制剂质量差异很大,使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此,制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。随着杂交瘤技术的诞生,这一目标得以实现。
 
  单抗制备的简要过程:
 
  骨髓瘤细胞:一般不分泌抗体,能在体外无限繁殖和连续继代培养,且为HPRT一(次鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)或TK-(胸腺嘧啶核苷激酶)。多用BALB/C小鼠的骨髓瘤细胞。[小鼠骨髓瘤细胞能在体外无限增殖传代并不分泌抗体。肿瘤细胞DNA生物合成有两条途径:一条由糖、氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,这是主要途径。这条途径可被叶酸的拮抗物一氨基喋呤(A)所阻断(但如果培养基中含核苷酸“前体“次和胸腺嘧啶核苷,即便有A存在,细胞通过另一途径(称替代途径或应急途径)也可合成核苷酸。但后一途径需次鸟嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)存在)。]
 
  淋巴细胞:经过免疫处理的淋巴细胞,多用大鼠或小鼠。
 
  免疫方法:对细胞或微生物抗原可直接注射如小鼠体内,可溶性蛋白抗原可与等量的福氏佐剂混合乳化后,注入到动物体内。