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单克隆抗体介绍与技术

更新时间:2022-10-26   点击次数:1104次

单克隆抗体是通过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆,产生均一性的抗体。  

单克隆抗体优点:纯度高,灵敏度高,特异性强,交叉反应少,制备的成本低。缺点:对技术有一定的要求,而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位。

单个B细胞抗体制备技术是近年来新发展的一种独立于杂交瘤融合技术和噬菌体展示技术的、新一代快速制备单克隆抗体的技术。这种技术是以 B 细胞为起始点,是利用每个 B 细胞只含有一个功能性轻链可变区 DNA 和一个重链可变区 DNA 序列,每个 B 细胞只产生一种特异性抗体的特性,可以直接从单个 B 细胞中扩增抗体基因,获得单个 B 细胞所表达的抗原特异性抗体。该方法具有高通量,高效率,低细胞数等优点。

 

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1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上,创建立杂交瘤技术,他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠B细胞融合,成为杂交细胞系,既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性,又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点

使用免疫动物原免疫小鼠使小鼠产生致敏B淋巴细胞。一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法:

动物体内生产法:操作简单,体内腹水浓度高滴度好,抗体中混入小鼠杂蛋白(包括Ig),容易引入动物病毒污染,动物牺牲量大。

体外培养法:制备抗体品质高不含杂蛋白不含病毒污染,纯化方便,适用于大规模生产制备。

单克隆抗体问世以来,由于其有的特征已迅速应用于医学很多领域。主要表现在以下几个方面。

1.检验医学诊断试剂

作为检验医学实验室的诊断试剂,单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点,广泛应用于酶联免疫吸附试验放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用,很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。

  • 蛋白质的提纯:

单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质(如Speharose 2B、4B、6B等)上,并制备成层析柱。当样品流经层析柱时,待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合,其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后,改变洗脱液的离子强度或pH,欲分离的抗原与抗体解离,收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。

  • 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术

将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接,利用单克隆抗体的导向作用,将药物或放疗物质携带至靶器官,直接杀伤靶细胞,称为肿瘤导向治疗。另外,将放射性标记物与单克隆抗体连接,注入患者体内可进行放射免疫显像,协助肿瘤的诊断。单克隆抗体主要为鼠源性抗体,异种动物血清可引起人体过敏反应。因此,制备人-人单克隆抗体或人源化抗体更为重要,但此方面仍未取得明显进展。

单体克隆同时也存在局限性单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应,所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。单体克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体且制备技术复杂,而且费事费工,所以单克隆抗体价格也高。

我国的单克隆药物从无到有,并且在我国医药市场发挥越来越重要的作用。目前我国单抗市场规模每年以50%以上的速度递增。单克隆抗体药物已经成为生物制药中重要的一类,单克隆抗体仍是研发的热点,也将是未来生物制药行业发展的重要动力所在