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多克隆抗体制备实验方法

更新时间:2022-07-25   点击次数:732次
  多克隆抗体制备主要是哺乳动物和禽类,如兔、绵羊、山羊、鼠、马等。动物选择根据抗体的用途和量来决定,也与抗原的性质有关。如需要大量的抗体,则用大动物;如要获得直接标记诊断的抗体,则用本种动物;如要获得间接标记诊断的抗体,则用异源动物;如抗原量少,且难获得,则用纯系小鼠;一般实验室用抗体,多用兔或鼠。对于用于诊断的抗体,建议用动物通常选年轻、健康的雄性动物,怀孕的雌性动物一般不用于制备抗体。
 
  多克隆抗体制备实验方法:
 
  ⒈ 抗原的制备
 
  抗原制备的主要目的在于在免疫动物体内产生强、适当的抗体。由于纯化的抗原适合产生抗体,因此在注射前通常采用一些经典的方法,比如柱层析、分级萃取、亚细胞分离等进行抗原的分离和纯化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中为可见的单一带,抗原从凝胶中的抽提可作为纯化的步骤。
 
  ⒉ 预放血
 
  轻轻的将兔子放在特制兔盒中,处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部,观察到进针后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。结束收集后,退出针头并按压伤处以制止血流,再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统,再将试管在4°C 放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落,将血液转移至塑料离心管中,4°C,10,000g离心10分钟,收集上清液在4°C保存。