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多克隆抗体制备的常见问题解析

发布时间:2022-01-13   点击次数:126次
  多克隆抗体制备能识别出与免疫原蛋白具有高同源性的蛋白,或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白,例如当未测试物种中的抗原性质未知时,有时会使用多克隆抗体。可识别多个结构域,即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化,仍可以识别抗原,因此有更大的适应性。
  多克隆抗体制备的常见问题解析:
  1、免疫动物该如何选择?
  选择宿主动物时,一般要考虑两个问题:
  (1)免疫效果能否保证。特别是对于蛋白抗原的情况,为了保证免疫成功,就要求宿主动物与抗原来源物种之间有较远的亲缘关系,如果不太能确定亲缘关系的远近,建议把抗原的序列与被免疫的动物相应的蛋白的序列进行一个对比,优先选择同源性较低的物种进行免疫。
  (2)抗血清产量的问题。根据实验目的不同,抗血清的用量也有所不同。
  如果后续是做Western Blot,那么只需要一点点血清就够了,这个时候就可以选用小鼠这样的小动物作为免疫动物,而如果想生产二抗作为商业使用,则可选用羊、驴、马这样的大型动物,大型动物还可以进行多次放血,以提高动物的利用率
  2、如何选择抗原?
  (1)降解的蛋白抗原利于制备用于筛选细菌表达cDNA文库或免疫沉淀。
  (2)用于筛选真核细胞转染系统表达的cDNA文库或免疫沉淀,建议选用自然的蛋白抗原。
  (3)如果制备抗独特型抗体,所用抗原可以是可溶性Ig分子,或者是完整的细胞,也可以是基因工程表达产品独特型决定簇、人工合成多肽及抗原化抗体等。
  目前,以各类病原生物活体感染动物而获得多克隆抗体(抗血清)作为检测抗体,仍是常用方法。
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