大肠杆菌是目前应用广泛的蛋白表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电冰进行分析。
蛋白表达操作步骤：
一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导
1.接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL.21菌株于5mL.LB液体培养基中（含100ug/ml氨苄青霉素），37C震荡培养过夜。
2.转接lml过夜培养物于100mL（含100ug/l.氨苄青霉素）LB液体培养基中，37℃震荡培养至0D600=0.6-0.8。取10u1样品用于SDS-PAGE分析。
3.加入IPTG至终浓度0.5mmol/1，37℃继续培养1-3h.
4.12，000rpm离心10min，弃上清，菌体沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。
二、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的分离，纯化
1.NTA层析柱的准备：在层析柱中加入1ml.NTA介质，并分别用8l去离子水，8mL.上样缓冲液洗涤。
2.重组蛋白的变性裂解：在冰浴中冻融菌体沉淀，加入5ml.上样缓冲液，用吸管抽吸重悬，超声波破裂菌体，用振荡器等轻柔的混匀样品60min，4℃12000rpm离心30min，将上清吸至一个干净的容器中，并弃沉淀。取10u1上清样品用于SDS-PAGE分析。
3.上清样品以10-15ml./h流速上Ni2+-NTA柱，收集流出液，取10u1样品用于SDS-PAGE分析。
4.洗脱杂蛋白：用Washing Buffer以10-15ml./h流速洗柱，直至0D280=0.01.分步收集洗脱液，约3-4h，取10ul洗脱开始时的样品用于SDS-PAGE分析。
5.洗脱目标蛋白：用Elution Buffer洗柱，收集每1l.级分，分别取10u1样品用于SDS-PAGE分析。
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