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噬菌体筛选分离技术你知道怎么做吗?

发布时间:2021-01-14   点击次数:35次
   噬菌体筛选对理化因素的抵御力比普通细菌的繁殖体强,个别经75℃30分钟以上才失去活性,对紫外线敏感。噬菌体是侵袭微生物的病毒,可沾染细菌、真菌、螺旋体和支原体等。噬菌体只借居于易感宿主菌体内,故可用于细菌的鉴定和分型。噬菌体结构简单,基因数量少,其宿主细胞易于培育,是基因工程和分子生物学研讨的主要工具。噬菌体存在病毒的生物学特点,即个体渺小,构造简略,只含有一种核酸DNA或RNA,只能在活的细胞内以复制方法进行滋生。噬菌体有蝌蚪形、球形和细杆状3种状态。多数噬菌体呈蝌蚪形,由头部和尾部组成。头部衣壳跟尾部的化学组成是蛋白质,头部衣壳内存有噬菌体的遗传物质核酸DNA或RNA,尾部有能辨认宿主菌细胞名义的特别受体,与噬菌体吸附有关。
  噬菌体的分离技术试验:
  1.制备菌悬液:取大肠杆菌斜面一支,加4ml无菌水洗下菌苔,制成菌悬液。
  2.增殖培养:于100ml三倍浓缩的肉膏蛋白胨液体培养基的三角烧瓶中,加入污水样品200ml与大肠杆菌悬液2ml,37℃培养12-24小时。
  3.制备裂解液:将以上混合培养液2500r/min离心15分钟。将以灭菌的蔡氏过滤器用无菌操作安装于灭菌抽滤瓶上,用橡皮管连接抽滤瓶与安全瓶,安全瓶再连接于真空泵。将离心上清夜倒入滤器,开动真空泵,过滤除菌。所得滤液倒入灭菌三角瓶内,37℃培养过夜,以作无菌检查。
  4.确证试验
  经无菌检查没有细菌生长的滤液作进一步证明噬菌体的存在。
  ①于肉膏蛋白胨琼脂平板上加一滴大肠杆菌悬液,再用灭菌玻璃涂布器将菌液涂布成均匀的一薄层;
  ②待平板菌液干后,分散滴加数小滴滤液于平板菌层上面,里37℃培养过夜。如果在滴加滤液处形成无菌生长的透明噬菌斑,便证明滤液中有大肠杆菌噬菌体。

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