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蛋白表达系统的含义及主要构成分析

发布时间:2020-10-22   点击次数:18次
   蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。
  蛋白表达一般由以下几个部分组成:
  1.宿主:表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同;
  2.载体:载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同,分为原核(细菌)表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导,外源基因可以在宿主中表达;
  3.辅助成分:有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。
  对于一个蛋白来说:
  首先了解该蛋白的基本信息,获得序列信息,了解构成情况。
  然后再对蛋白序列进行生物信息学分析:
  1.是否含有稀有密码子;
  2.是否有二硫键;
  3.是否含有信号肽;
  4.磷酸化和糖基化位点。
  再构建载体在不同的菌株中表达,同时尝试不同的诱导条件,包括:诱导时OD值、诱导温度、诱导时间、分析表达结果。同时进行细菌生长曲线作图,观察目的蛋白对宿主菌是否有毒害作用。通过最终的表达结果分析过程。
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