欢迎来到安诺伦(北京)生物科技有限公司网站!

热门关键词:抗体类,蛋白类,分子细胞类,化学品与试剂

产品中心PRODUCTS
新闻中心您现在的位置:首页 > 新闻中心 > 纳米抗体制备方法之噬菌体筛选技术

纳米抗体制备方法之噬菌体筛选技术

发布时间:2021-10-25   点击次数:58次
  纳米抗体是在骆驼科及鲨鱼科动物血清中大量存在的一种天然抗体,与常规单克隆抗体相比,纳米抗体缺失轻链,其重链可变区VHH的CDR3区较长,是目前已知的可结合抗原的单位。特殊的结构特征和性质赋予了其一些其它常规抗体或抗体片段所不具有的特性。纳米抗体(nanobodies,Nbs)因具有较小的相对分子质量,其独特的分子结构使其适用于疾病诊断治疗等诸多领域,当前得到了广泛的关注。
  纳米抗体制备方法之噬菌体筛选技术:
  噬菌体展示技术是一种由Simth于1985年建立的用于识别蛋白质和它相互作用蛋白的体外筛选技术。噬菌体展示的具体原理是将外源蛋白质的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白的一个基因上,使外源基因随着外壳蛋白的表达而表达,蛋白以与外壳蛋白融合的形式展示在噬菌体表面。被展示的蛋白或者多肽可以保持相对的空间结构和生物活性,因而可以利用靶蛋白对其进行筛选。
  筛选的方法主要分为固相筛选和液相筛选两种。通过生物淘洗法、竞争法、消减法、选择性感染筛选、延迟性感染筛选等方法可以对和靶蛋白强力结合的基因片段筛选出来。具体地,筛选过程以靶蛋白为固定相,以噬菌体展示文库为流动相,经过一段时间的共同孵育后,洗去未结合的游离噬菌体,然后以竞争受体或酸洗脱下与靶分子结合吸附的噬菌体,洗脱的噬菌体感染宿主细胞后经繁殖扩增,进行下一轮洗脱,经过3轮~5轮的“吸附-洗脱-扩增”后,即可得到与靶蛋白具有高亲和性的抗体。经过筛选后,对筛选得到的蛋白进一步用酶联免疫吸附测定或免疫印迹法对其进行特异性筛选,获取目的克隆或铺盘进行单克隆分离继而进行大规模生产。
在线客服
电话咨询 18915310964
在线客服