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多克隆抗体制备关于抗体的鉴定说明

发布时间:2020-05-28   点击次数:117次
   多克隆抗体制备一般包括以下几个步骤:
  1.制备抗原;
  2.选择实验动物;
  3.动物免疫;
  4.试取血进行测试,看看是否成功免疫;
  5.如果成功免疫,杀死实验动物,将血清全部采集;
  6.纯化出抗体;
  7.鉴定抗体,包括纯度以及特异性。
  多克隆抗体制备的抗体鉴定说明:
  1.抗体的效价鉴定
  不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
  2.抗体的特异性鉴定
  抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按相关公式计算交叉反应率。如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好。
  抗体的亲和力是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol,通常K的范围在108-1010/mol,也有多达1014/mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。
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