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单克隆抗体制备的基本原理与过程

更新时间:2023-01-18   点击次数:331次
  单克隆抗体细胞在体外培养时通常使用合成培养基,再添加胎牛血清配成培养基。但是血清中成分复杂,这对纯化单克隆抗体来说是个难题, 而低纯度的单克隆抗体用于临床治疗可能导致一系列反应。同时,血清来源有限,各批量间质量差异大,直接影响杂交瘤细胞的连续性培养。
 
  单克隆抗体制备的基本原理与过程:
 
  原理:
 
  B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。
 
  制备的过程:
 
  免疫动物
 
  免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
 
  细胞融合
 
  采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。