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技术 | 原核蛋白表达系统

发布时间:2022-01-24   点击次数:165次

关于细菌表达——

由于其性质,细菌表达系统是一种理想的蛋白质表达系统。它通常是生产重组蛋白和抗体的。到目前为止,许多细菌已经被很好地研究。

在大量细菌中,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌细胞系是**的重组蛋白表达宿主。它们在适宜条件下以极低的成本快速复制,而表达水平高,这种特性使其成为大规模生产的有效和经济的方式。他们的基因组已完全测序,遗传背景和代谢途径****。另外,由于结构简单,细菌比真核生物更容易转染。这些期望的特征使表达过程更容易和更快速。

但在某些方面,优势也是不利的。可以在细菌中容易地表达具有少量修饰的蛋白质。虽然细菌中没有细胞核,高尔基体和内质网。这些结构在细胞运输和翻译后修饰(PTM)过程中是必需的。这导致不能产生具有细菌表达系统的膜结合蛋白,包括胰岛素受体,血型糖蛋白,几种酶等。由于在正确折叠中需要这种修饰,因此细菌中产生的蛋白质通常是无活性的并且不起作用。就这些方面而言,真核表达系统更适合表达这些需要折叠,修饰和特殊结构的蛋白质,即使它比细菌表达系统更昂贵并且花费更多时间。

每个表达系统都有其优点和缺点,希望您在实验中,慎重选择自己的蛋白表达系统,取得满意的结果。(蛋白表达系统有何区别,如何挑选?点此直达。)

大肠杆菌表达系统




图1 大肠杆菌表达系统简要流程图

——巨大优势,供您选择:

代谢途径和基因表达的更清晰

通过全基因组测序;

成熟的基因克隆和表达系统;

繁殖快,培养方法简单,操作简便,遗传稳定。

生命周期短

大肠杆菌,可以在充足的营养条件下每20-30分钟繁殖一次;

具有成本效益的大规模发酵和巨大的生存潜力。

高水平的靶基因表达

表达水平高于正常的真核表达系统。它可以表达高达5%-30%外源基因的蛋白质。

.遗传背景明确

大肠杆菌的遗传背景和生理特性非常清楚。有多种细菌菌株具有不同的耐药性,营养缺陷型突变和抑制突变可供选择。

抗污染能力强,后续实验简单,易控。

有许多现存表达载体可供选择,它是FDA批准的基因工程宿主菌株。




大肠杆菌表达成功案例




表达蛋白浓度测定







图4 表达蛋白浓度测定曲线

结果总结:由上述实验数据以及浓度可知,表达蛋白水平高,稳定,优化条件成功。

枯草芽孢杆菌表达系统

——优势明确,大量表达蛋白

1. 细胞壁的组成简单,分泌的蛋白质产品中不会混杂有细胞内毒素

2. 能够大量分泌胞外/目的蛋白,回收和纯化都较为简单

3. 拥有一套高效的分泌信号肽及分子伴侣系统,可以完成目的蛋白的高效分泌表达,避免包涵体的形成

我司优势

1. 拥有多种枯草芽孢杆菌表达载体,如pHT101和pHT254.

2. 有多种不同的表达宿主,如胞内表达的AS1、1012和168,分泌表达的WB800N等,可满足客户胞内或者分泌表达的不同要求。

3. 可制备高效率的枯草芽孢杆菌感受态。

经典案例

某流感病毒衣壳蛋白,大小100kD,客户提供基因信息,经优化后构建质粒,表达图谱如下:




图5 枯草芽孢杆菌168及1012中蛋白质的表达

我司原核蛋白表达服务流程





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