欢迎来到安诺伦(北京)生物科技有限公司网站!

热门关键词:抗体类,蛋白类,分子细胞类,化学品与试剂

产品中心PRODUCTS
技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 带你学会一种药物研究利器——等温滴定量热法

带你学会一种药物研究利器——等温滴定量热法

发布时间:2021-11-23   点击次数:106次

等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要方法,它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线,原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。

ITC检测方式与化学反应中的酸碱滴定法相似,在ITC测定中,首先将一种反应物置于一个温控样品池中,并通过一个热电偶回路与一个参比池相偶联,样品池和参比池处于相同的外部环境。特定的滴定剂(按实验需要选择)定量滴加到样品池中,当样品与滴定剂发生反应时,样品池和参比池的温度会发生变化,反应变化的能量可以被 ITC检测仪灵敏地检测出来,并通过正反馈或负反馈触发恒温装置保持温度恒定。在反应过程中涉及到的热动力学参数,如结合常数、结合位点数、反应焓变及熵变等,这些热动力学参数可以经等温滴定量热仪自带的软件拟合处理获得,并经过软件处理间接获得吉布斯自由能、恒压摩尔热熔等。通过这些参数,可以获得分子间反应的详细信息。蛋白质、核酸等生物大分子有序空间结构或复合物的形成都是可逆的热驱动过程,使用ITC技术可以敏锐检测到生物分子相互作用(包括分子间和分子内部)过程中热量的变化。这是基于此,等温滴定量热技术广泛应用于生物及医药等相关领域。

等温滴定量热技术的优势包括:快速、准确、样品用量小、对反应体系的要求不高(如对体系的透光度、浑浊度、粘滞度要求不高),通过对反应过程中的热动力学检测及相关参数的计算,可以特异性地反应分子间相互作用的程度。

如果小伙伴们要进行分子间相互作用的研究,如研究蛋白质与蛋白质的相互作用、蛋白质与糖相互作用、药物与蛋白质相互作用、小分子物质与蛋白质间相互作用、酶促反应动力学分析、核酸与核酸相互作用、核酸与小分子相互作用等,可以考虑运用等温滴定量热技术进行检测。

艾柏森提供等温滴定量热法服务

艾柏森生物可提供优质的等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)服务,获得分子相互作用的完整热力学参数。ITC通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地检测和记录一个变化过程的量热曲线,原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。

ITC提供了一种非常简单而且准确的方法用于抗体的质量控制以及抗体和抗体产品的性质分析。ITC可快速有效的测定多种参数,例如抗体亲和力(Ka)、抗原结合热(H)以及抗原抗体的结合比(n),结合热还可用来指示抗原抗体在体内、体外的相互作用。

在ITC实验中,一个配体(如受体、抗体)分子在恒温条件下滴定到另一个相互作用分子的溶液中,结合释放的热(H)被实时记录下来。连续进行多次滴定,分子结合释放或吸收的热直接正比于结合的分子数量,当系统达到饱和时,只能观察到稀释热。将每次滴定产生的热效应与滴定和被滴定分子的摩尔比作图,可以得到一条结合曲线(Figure 1)。ITC能自动完成滴定、数据采集和分析,使整个实验过程非常简单。




Figure 1. Basic principle of isothermal titrationcalorimetry


实验流程:





在线客服
电话咨询 18915310964
在线客服